Please use this identifier to cite or link to this item:
http://hdl.handle.net/1843/33634| Type: | Tese |
| Title: | Purificação de substâncias antibacterianas e estudo de plasmídios colicinogênicos de Shigella sonnei |
| Authors: | Jaqueline Silvana Moreira |
| First Advisor: | Luiz de Macêdo Farias |
| First Co-advisor: | Paula Prazeres Magalhães |
| metadata.dc.contributor.advisor-co2: | Regina Maria Nardi Drummond |
| First Referee: | Daniel Moreira dos Santos |
| Second Referee: | Jacques Robert Nicoli |
| Third Referee: | Lívia Tereza de Andrade Souza |
| metadata.dc.contributor.referee4: | Vera Lúcia dos Santos |
| Abstract: | Shigella é agente etiológico da shigelose, doença que apresenta padrão de disseminação mundial, com cerca de 165 milhões de indivíduos infectados e aproximadamente 1 milhão óbitos/ano, a maioria, crianças de países em desenvolvimento. Peptídios e ou proteínas antimicrobianas são substâncias biologicamente ativas, produzidas por organismos procariotos e eucariotos. A expressão dessas substâncias confere ao organismo produtor uma linha de defesa contra patógenos, ou ainda, vantagem competitiva para os microrganismos produtores. O nosso grupo de pesquisa vem investigando a produção de peptídios e ou proteínas antimicrobianas, em especial, bacteriocinas. O objetivo geral do trabalho foi isolar e identificar substâncias antibacterianas e avaliar a presença de plasmídios colicinogênicos em uma amostra de Shigella sonnei. Para purificação e identificação, as biomoléculas foram extraídas por precipitação proteica da fração intracelular com 30-75% p/v de sulfato de amônio (C-75), purificadas por processos cromatográficos, avaliadas quanto à ação antagonista contra um outro isolado da mesma espécie, analisadas em relação à pureza e sequência dos resíduos de aminoácidos por espectrometria de massas e classificadas com base nas sequências de aminoácidos disponíveis em bancos de dados. A identificação dos plasmídios colicinogênicos foi realizada pela extração do DNA extracromossômico, construção das bibliotecas de DNA, análise em sequenciador de nova geração, identificação das ORFs por comparação em bancos de dados, transferência dos plasmídios colicinogênicos por conjugação e transformação, confirmação da ação antagonistas produzidas pelos isolados transconjugantes e transformantes e análises em gel de poliacrilamida. Os ensaios de purificação e sequenciamento identificaram sete substâncias antibacterianas e, dentre essas, uma proteína tipo histona e uma proteína fator de hibernação ribossômica. O sequenciamento genético identificou a presença de dois plasmídios colicinogênicos, codificadores de uma colicina com massa molecular 61,2kDa e da colicina E1. Os dados demostram que S. sonnei produz diversas substâncias bioativas que podem auxilia-la nos processos de infecção, colonização e obtenção de nutrientes. |
| Abstract: | Shigellais the etiological agent of shigellosis a worldwide distributed severe type of inflammatory diarrhea. The disease affects about 165 million people and it is responsible for nearly 1 million deaths mainly of children from developing countries 5each year. Antimicrobialpeptides and/or proteins are biologically active substances, produced by prokaryotes and eukaryotes.The expression of these substances may contribute to the defense of the producer organismagainst pathogens and may also represent a competitive advantage to it.Our research group investigates the production of antimicrobial peptides and/or proteins, in special, bacteriocins. The aim of this 10investigation was to isolate and identify antibacterial substances and to evaluate the presence of colicinogenic plasmids in a sample of Shigella sonnei. For purification and identification, the biomolecules were extracted from the intracellular fraction by protein precipitation employing ammonium sulfate 30-75 % (C-75), purified by sequential chromatographic steps,evaluated about antagonistic action against another isolate of 15the same species, analyzed for purity, and sequenced by mass spectrometryand compared with available in databases.The identification of the colicinogenic plasmids was performed by extracromossomic DNA extraction,construction of DNA libraries, next-geration sequencer analysis, identification of the ORFs for comparison in databases, transfer of the colicinogenic plasmids by conjugation and transformation, 20confirmation of the antagonistic action produced by the transconjugant and transformant isolates and polyacrylamide gel analyzes.Purification and sequencing assays identified seven antibacterial substances and among them a histone-like protein and a ribosomal hibernation factor protein. Genetic sequencing identified the presence of two colicinogenic plasmids, encoding a colicin with a molecular mass of 61.2kDa and colicin 25E1. The data show that S. sonneiproduces several bioactive substances that can aid in the processes of infection, colonization and nutrients. |
| Subject: | Microbiologia Shigella sonnei Bacteriocinas Plasmídeos de Bacteriocinas |
| language: | por |
| metadata.dc.publisher.country: | Brasil |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| metadata.dc.publisher.department: | ICB - DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA |
| metadata.dc.publisher.program: | Programa de Pós-Graduação em Microbiologia |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/33634 |
| Issue Date: | 5-Oct-2018 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| Tese corrigida Jaqueline S. Moreira.pdf | 5.13 MB | Adobe PDF | View/Open |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.