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Type: Dissertação de Mestrado
Title: Estudo da ação de poliânions sobre a atividade das enzimas colesterol esterase e colesterol oxidase, utilizando lipoproteínas plasmáticas como substratos
Authors: Guilherme Hideki Yoshizane Costa
First Advisor: Jader dos Santos Cruz
Abstract: Sugiuchi et al. (1995) desenvolveram um método direto para a determinação de colesterol proveniente da lipoproteína de alta densidade (HDL), sem a necessidade de procedimentos pré-analíticos. O teste consiste na formação de complexos solúveis das apoB100-lipoproteínas com o poliânion -ciclodextrina sulfato, o que reduz a ação das enzimas colesterol esterase e colesterol oxidase sobre lipoproteínas de baixa densidade (LDL), muito baixa densidade (VLDL) e quilomicra. A inibição total da catálise enzimática sobre as apoB100-lipoproteínas é alcançado após a ligação covalente de moléculas de polietilenoglicol às superfícies das enzimas. Após essa ligação, somente as partículas de HDL ficam disponíveis para ação da colesterol esterase e colesterol oxidase. O presente trabalho verificou a capacidade de inibição da reação catalisada pelas enzimas colesterol esterase e colesterol oxidase pelos poliânions: ácido fosfotúngstico, sacarose octassulfato, sulfato de condroitina e -ciclodextrina sulfato. Foram determinados parâmetros cinéticos para a enzima colesterol esterase nativa e após adição de polietilinoglicol à sua superfície utilizando calorimetria de titulação isotérmica. Os resultados evidenciaram que o ácido fosfotúngstico é capaz de inibir satisfatoriamente a ação das enzimas sobre as apoB100-lipoproteínas. Os valores da constante de Michaelis-Menten (Km) para colesterol esterase nativa utilizando HDL e LDL foram de 4,26 M de linoleato de colesterila e 13,14 M de linoleato de colesterila, respectivamente. Após a adição do polietilenoglicol à enzima o Km da enzima utilizando HDL como substrato foi alterado para 21,6 M de linoleato de colesterila. Os resultados desse estudo fornecem o embasamento para o desenvolvimento de um reagente para a determinação de colesterol HDL.
Abstract: Sugiuchi et al. (1995) developed a direct method to determine cholesterol from high density lipoprotein, with no need for pre-analytical procedures. The assay consists of the formation apoB100-lipoproteins' soluble complexes with -cyclodextrin sulfate polyanion, which reduces the action of the enzymes cholesterol esterase and cholesterol oxidase over low density lipoprotein (LDL), very low density lipoprotein (VLDL) and chylomicra. Total inhibition of the enzymatic catalysis over apoB100-lipoproteins is achieved after the covalent bonding of polyethyleneglycol on the enzymes surfaces. Only the HDL's particles are available for the catalysis of cholesterol esterase and cholesterol oxidase. This study verified the inhibition of the reactions catalyzed by cholesterol esterase and cholesterol oxidase by the polyanions: phosphotungstic acid, sucrose octasulfate, chondroitin sulfate and - cyclodextrin sulfated. Kinetics parameters for the native enzyme cholesterol esterase and after the bonding with polyethyleneglycol were also determinate. The results showed that phosphotungstic acid is able to inhibit satisfactorily the enzymes' action over apoB100-lipoproteins. The Km's values for native cholesterol esterase with HDL and LDL were 4,26 M of cholesteryl linoleate and 13,14 M of cholesteryl linoleate, respectively. After the bound of polyethyleneglycol on the cholesterol esterase surface the enzimes Km for HDL was altered to 21,6 M of cholesteryl linoleate. The results of this study provide the knowledge to develop a reagent used to determine HDL cholesterol.
Subject: Bioquímica e imunologia
language: Português
Publisher: Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials: UFMG
Rights: Acesso Aberto
URI: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-A29FR6
Issue Date: 3-Jul-2015
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