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Tipo: Dissertação de Mestrado
Título: Utilização de métodos de análise no fracionamento de biomoléculas potencialmente imunossupressoras do fungo ambiental Trichoderma stromaticum
Autor(es): Cintia Lima dos Santos
primer Tutor: Jane Lima dos Santos
primer Co-tutor: Arno Heeren de Oliveira
primer miembro del tribunal : Maria Isabel Guimarães Severo
Resumen: O Trichoderma stromaticum é utilizado como agente de biocontrole do patógeno Moniliophora perniciosa, causador da doença vassoura-de-bruxa do cacaueiro. Os dados coletados mostraram que os esporos de T. stromaticum inibem mecanismos de defesa da imunidade inata de camundongos. Isto sugere que os esporos possuem substâncias biologicamente ativas com efeitos imunossupressores. O objetivo desta pesquisa foi fracionar possíveis moléculas do fungo T. stromaticum que apresentam potencial imunossupressor na funcionalidade de fagócitos. Esporos do T. stromaticum cultivados em meio BDA (batata dextrose agar) foram extraídos da placa de cultura e aquecidos a 100 °C por 15 minutos (esporos inativos) ou não (esporos ativos) para posterior processamento e avaliação da ultraestrutura por Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET). Os esporos ativos foram utilizados para a produção do extrato bruto de Trichoderma Stromaticum (ExtTs) e posterior fracionamento pela técnica de Cromatografia líquida de proteína rápida (CLPR). As frações resultantes da cromatografia foram utilizadas em ensaios de produção de óxido nítrico por macrófagos pela reação colorimétrica de Griess e imunogenicidade dos esporos e ExtTs (Extrato bruto de Trichoderma stromaticum). Os resultados mostraram que a ultraestrutura dos esporos inativos revelou desorganização intracelular e aumento da espessura da parede. O fracionado do extrato bruto gerou uma fração de pools denominados 2 e 4 que inibiram significativamente a produção de NO por macrófagos ativados com IFN- + LPS. Pequenas concentrações de esporos de T. stromaticum mudaram significativamente a ultraestrutura de macrófagos murinos. Tais mudanças sugerem a possibilidade de ocorrência do processo de autofagia. O método de análise Cromatografia líquida de proteína rápida permitiu selecionar uma fração do T. stromaticum com potencial imunossupressor que constitui alvo de grande interesse para uma futura caracterização da molécula, devido à sua possível relevância terapêutica. Até então, nosso estudo sugere que o uso de T. stromaticum , como biopesticida em aparelhos de aerossol, deve ser realizado com cuidado para evitar problemas de saúde para os trabalhadores das plantações.
Abstract: Trichoderma stromaticum is used as biocontrol agent of the cacao witches broom pathogen Moniliophthora perniciosa. The collected data showed that T. stromaticum spores inhibit the defense mechanisms of innate and adaptative immunity of mice. This suggests that the spores have biologically active substances with immunosuppressor effects. The goal of this research was fractionated T. stromaticum fungi molecules that show immunosuppressor potential when functioning as phagocytes. T. stromaticum spores grown on potato dextrose agar at room temperature, for 7-10 days were collected and heat-treated at 100 ºC for 15 min (spores inactive) or not (active spores) to later processing and evaluation of the ultrastructure through Transmission Eletron Microscopy (TEM). The active spores were used to the yield of the gross extract and later fractioning through Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC). The fractions resulting from the chromatography were used in assays of nitrite oxide by macrophages through the Griess Reaction colorimetric and immunogenicity of the spores and ExtTs. The results showed that inactive spore ultrastructure revealed intracellular disorder and an increase in the thickness of the wall. The fractioned of the crude extract generated a pools fraction called 2 e 4, which significantly inhibited NO yield by macrophages activated with IFN- + LPS. Small concentrations of spore T. stromaticum change significantly ultraestructrure of murine macrophages. Such changes suggest the possiblility of occurrence of the process of autophagy. The method of analysis allowed to select a fraction of T. stromaticum with immunosuppressor potencial that constitues target of great interest to future molecular characterization due to its possible therapeutical relevance. Until then, our study suggests that the use of T. stromaticum as a biopesticide in aerosol devices should be performed carefully to avoid health problems to plantation workers.
Asunto: Engenharia nuclear
Idioma: Português
Editor: Universidade Federal de Minas Gerais
Sigla da Institución: UFMG
Tipo de acceso: Acesso Aberto
URI: http://hdl.handle.net/1843/MBAM-8L8NKJ
Fecha del documento: 23-ago-2011
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