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http://hdl.handle.net/1843/SMOC-AC2HVN| Type: | Dissertação de Mestrado |
| Title: | Clostridium perfringens e Clostridium difficile em relação a outros enteropatógenos em cães diarreicos |
| Authors: | Amanda Nadia Diniz |
| First Advisor: | Francisco Carlos Faria Lobato |
| First Co-advisor: | Rodrigo Otavio Silveira Silva |
| First Referee: | Gustavo de Oliveira Fulgêncio |
| Second Referee: | Roberto Mauricio Carvalho Guedes |
| Third Referee: | Rodrigo Otavio Silveira Silva |
| Abstract: | O presente trabalho teve como objetivo avaliar a ocorrência da infecção por Clostridium perfringens e Clostridium difficile frente a outros enteropatógenos de relevância em cães, como parvovírus, coronavírus, rotavírus, Giardia spp., Salmonella spp. e Escherichia coli. Foram coletadas 154 amostras fecais, sendo 92 de cães diarreicos, oriundos de hospitais veterinários e 62 amostras de cães aparentemente saudáveis (controle). Dividiu-se os cães em quatro faixas etárias: 0 a 6 meses (imunidade passiva), 7 a 12 meses (estabelecimento da imunidade ativa), 13 a 60 meses (adultos) e maiores do que 61 meses (idosos). Após isolamento de C. perfringens em meio seletivo, realizou-se PCR para os seguintes genes: cpa, cpb, etx, iap, cpb2, cpe, netB, netE, netF e netG. As estirpes isoladas de C. difficile foram submetidas a ribotipagem e detecção dos seguintes genes tcdA, tcdB, tpi e cdtB. Realizou-se ainda ELISA para detecção das toxinas A/B em amostras de fezes de onde foram isoladas estirpes toxigênicas de C. difficile e, além disso, ELISA para a detecção da enterotoxina (CPE) nas amostras de fezes de cães que foram positivos para estirpes de C. perfringens cpe +. Para o diagnóstico diferencial de outros enteropatógenos, realizou-se a pesquisa de Salmonella spp. por isolamento; detecção dos patotipos de E. coli por isolamento seguido de PCR, e testes rápidos para detecção de Parvovirus canino tipo 2 (CPV), coronavirus canino (CCV), rotavirus canino (CRV) e Giardia spp. Não foi identificado nenhum enteropatógeno em 52,1% dos animais diarreicos e em 50% dos cães saudáveis. Houve uma associação positiva entre a presença do gene cpe de C. perfringens e a ocorrência de diarreia (p=0,006), sendo a toxina CPE encontrada em metade dessas amostras fecais. O gene codificador da recém descrita toxina NetE foi encontrado em 70% das estirpes de C. perfringens positivas para cpe, todas oriundas de animais com idade superior a 12 meses. A frequência de estirpes toxigênicas de C. difficile aumentou em cães com idade superior a 60 meses e o ribotipo 014/020 foi o mais frequente no presente estudo. Entre as coinfecções detectadas destacam-se dois casos em que os cães eram positivos para C. perfringens tipo A cpe+ e netE+netF+ e C. difficile, algo inédito na literatura. Este estudo sugere que C. difficile e C. perfringens são importantes nas diarreias em cães e podem ocorrer em coinfecções com outros enteropatógenos, inclusive entre agentes do gênero Clostridium. |
| Abstract: | The aim of this study was to evaluate the occurrence of Clostridium perfringens and Clostridium difficile infection compared to other enteropathogens in dogs, such as parvovirus, coronavirus, rotavirus, Giardia spp., Salmonella spp. and Escherichia coli. A total of 154 fecal samples were collected, 92 from diarrheic dogs, from veterinary hospitals, and 62 from apparently healthy dogs (control group). The dogs were divided into four age groups: 0-6 months (passive immunity), 7-12 months (establishment of active immunity), 13-60 months (adults) and older than 61 months (seniors). After isolation of C. perfringens in selective media, the presences of the following genes were evaluated by PCR: cpa, cpb, etx, iap, cpb2, cpe, netB, netE, netF e netG. The isolated strains of C. difficile were ribotyped and the presences of the following genes were evaluated by PCR: tcdA, tcdB, tpi e cdtB. Two ELISAs were used to detect A/B toxins and enterotoxin in stool samples that were positive for isolation of C. difficile and C. perfringens strains positive for the gene cpe, respectively. The differential diagnosis of other enteropathogens included Salmonella spp. by isolation; isolation of E. coli followed by PCR; and immunochromatography tests to detect canine parvovirus type 2 (CPV), canine coronavirus (CCV), canine rotavirus (CRV) and Giardia spp. Approximately in 52,1% of diarrheic animals and 50% of healthy dogs were negative for all enteropathogens tested. There was a positive association between the presence of CPE gene (cpe) from C. perfringens and the occurrence of diarrhea (p=0.006), the CPE toxin was also detected in half of these fecal samples. The gene encoding the recently described NetE toxin (netE) was found in 70% of C. perfringens strains positive for CPE, all from adult dogs (aging more than 12 months). The frequency of isolation of C. difficile toxigenic strains increased in dogs over the age of 60 months, and the ribotype 014/020 was the most frequent in this study. Among the co-infections detected, stand out the first description of C. perfringens type A cpe+ and netE+ netF + and C. difficile coinfection in two dogs. This study suggests that C. difficile and C. perfringens are important enteropathogens in dogs and can occur in co-infections with other microorganisms, including Clostridium species. |
| Subject: | Ciência Animal |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/SMOC-AC2HVN |
| Issue Date: | 26-Jan-2016 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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