1. Repositório Institucional da UFMG
  2. Trabalhos Acadêmicos
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  4. Pós-Graduação em Bioquímica e Imunologia
  5. Teses de Doutorado
Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/1843/34675
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dc.contributor.advisor1Maria de Fátima Martins Hortapt_BR
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/6431550513796092pt_BR
dc.contributor.advisor-co1Glória Regina Francopt_BR
dc.contributor.referee1Carlos Renato Machadopt_BR
dc.contributor.referee2Ricardo Fujiwarapt_BR
dc.contributor.referee3Luíz Carlos Crocco Afonsopt_BR
dc.contributor.referee4Wanderson Duarte da Rochapt_BR
dc.creatorNatália Tomich de Paiva Mirandapt_BR
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/0740673738822247pt_BR
dc.date.accessioned2021-01-12T15:18:28Z-
dc.date.available2021-01-12T15:18:28Z-
dc.date.issued2016-04-28-
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/1843/34675-
dc.description.resumoTrabalhos anteriores de nosso grupo demostraram que promastigotas e amastigotas de Leishmania amazonensis possuem uma citolisina capaz de lisar eritrócitos e macrófagos, a qual chamamos de leishporina, devido ao seu mecanismo de lise ser por formação de poros na membrana de macrófagos. Embora a leishporina já tenha sido caracterizada por nós sob diversos aspectos bioquímicos, sua identidade molecular é ainda desconhecida. Uma vez que o genoma da L. major já foi completamente sequenciado, iniciamos nosso trabalho buscando por genes que pudessem codificar proteínas que tivessem atividade citolítica e ser responsável pela atividade da leishporina. Nossas pesquisas no banco de dados tritrypDB, revelaram a existência de 3 genes anotados como hemolisinas do tipo III putativas denominados LmjF36.5500, LmjF36.5510, LmjF36.5520. Estas sequências mostraram uma homologia significativa com outras hemolisinas do tipo III formadoras de poros e já caracterizadas em outros organismos. Mostramos por PCR em tempo real que 2 destes genes são expressos em promastigotas na fase estacionária, fase em que a expressão da atividade da leishporina é máxima. Quando comparamos a expressão destes mRNAs entre promastigotas e amastigotas, verificamos que o mRNA do gene Lm5500 é mais expresso em amastigotas, enquanto que para o mRNA de Lm5520 parece não haver diferenças significativas, como demonstrado por PCR em tempo real e Northern blot. Não detectamos mRNA para o gene Lm5510, o que sugere que este gene é pouco/ou não expresso. A fim de determinar a localização subcelular destas proteínas, anticorpos policlonais foram produzidos em camundongos BALB/c e utilizados em microscopia de imunofluorescência confocal. Aparentemente, a proteína codificada pelo gene LmjF36.5520 se localiza em uma estrurura alongada e única, que aparenta ser o Túbulo Multivesicular (MVT), que se estende do bolso flagelar até a extremidade posterior do parasito. A proteína codificada pelo gene LmjF36.5500 está localizada em estruturas que se assemelham aos acidodocalcissomos. Confirmando os resultados PCR em tempo real, não foi possível detectar a fluorescência para a proteína codificada pelo gene Lmjf36.5510. Parasitas superexpressores das proteínas Lm5500 e Lm5520 foram gerados para avaliarmos o fenótipo lítico dos mesmos. Nossos resultados demonstram que os clones que superexpressam as proteínas Lm5500 e Lm5520 têm sua atividade litica aumentada em relação aos mock transfectados. Esse resultado indica que esas proteínas são potencialmente candidatas a codificarem a leishporina ou a uma proteína importante para a ação da leishporina.pt_BR
dc.description.sponsorshipCNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológicopt_BR
dc.description.sponsorshipCAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superiorpt_BR
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de Minas Geraispt_BR
dc.publisher.countryBrasilpt_BR
dc.publisher.departmentICB - DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E IMUNOLOGIApt_BR
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Bioquímica e Imunologiapt_BR
dc.publisher.initialsUFMGpt_BR
dc.rightsAcesso Abertopt_BR
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/*
dc.subjectBioquímicapt_BR
dc.subjectImunologiapt_BR
dc.subject.otherBiologia molecularpt_BR
dc.subject.otherLeishmaniapt_BR
dc.subject.otherLeishmania majorpt_BR
dc.titleCaracterização e estudo funcional dos genes anotados como hemolisinas do tipo III em Leishmania major.pt_BR
dc.typeTesept_BR
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