Use este identificador para citar o ir al link de este elemento:
http://hdl.handle.net/1843/35737
Registro completo de metadatos
Campo DC | Valor | Idioma |
---|---|---|
dc.contributor.advisor1 | Flávio Guimarães da Fonseca | pt_BR |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/4028759481820525 | pt_BR |
dc.contributor.advisor-co1 | Thiago Lima Leão | pt_BR |
dc.contributor.referee1 | Jônatas Santos Abrahão | pt_BR |
dc.contributor.referee2 | Alexandre de Magalhaes Vieira Machado | pt_BR |
dc.contributor.referee3 | Breno de Mello Silva | pt_BR |
dc.contributor.referee4 | Leonardo Camilo de Oliveira | pt_BR |
dc.creator | Karine Lima Lourenço | pt_BR |
dc.creator.Lattes | http://lattes.cnpq.br/6305976188909906 | pt_BR |
dc.date.accessioned | 2021-04-16T18:06:50Z | - |
dc.date.available | 2021-04-16T18:06:50Z | - |
dc.date.issued | 2021-01-26 | - |
dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/1843/35737 | - |
dc.description.abstract | The Poxviridae family has globally recognized members that infect a range of vertebrate and invertebrate hosts that includes humans. Poxviruses are classified into two subfamilies: the Entomopoxvirinae comprises poxviruses that infect insects, while the Choropoxvirinae includes the ones that infect vertebrates. The subfamily Chordopoxvirinae currently contains eighteen genera and the genus Orthopoxvirus is one of the most investigated. Since 1999, the Vaccinia virus (VACV) has been reported in outbreaks involving humans, cattle and horses, among other animals. Brazilian VACV isolates (VACV-Br) are divided into two groups based on their virulence in mice infections: group 1 (less virulent) and group 2 (more virulent). Poxviruses multiplication is connected to the endoplasmic reticulum (ER) at the level that viral factories produced during replication are enveloped by their membranes. Moreover, the protein folding to achieve their correct three- dimensional conformation occurs mostly in the ER lumen. As a consequence, ER can respond to disturbances caused by the accumulation of unfolded proteins, leading to adequate processing of these proteins or even programmed cell death, through the unfolded protein response (UPR) pathway. This pathway has three main sensors, which include the ATF6, IRE1 and PERK proteins. This pathway is essential in the immune response, leading to the maturation and differentiation of immune cells and the production of cytokines. Therefore, the modulation of the UPR pathway could play an important role in the immune response triggered by poxviruses infection. In this project, we investigated the effects of the infection of VACV isolates Guarani P1 virus (GP1V) and Passatempo virus (PSTV), on the activation of UPR pathways in mouse embryo fibroblasts cells (MEFs). Reporter gene assays showed us the activation of ATF6 following VACVbr infection. In one-step / multi-step growth it was not possible to observe differences in the productivity of these viruses in the absence or presence of ATF6, however, in the plaque phenotype, it is possible to observe that in ATF6-WT cells the lysis plates are smaller when compared to the plates formed in the ATF6-KO cells. Through the RFLP assay, we verified that infection by the three analyzed viruses negatively modulates to the processing of the XBP1mRNA. The evaluation of the plaque phenotype in the presence of the IRE1 kinase and Rnase domain inhibitors showed us a decrease in the VACV-Br lysis plaque in the presence of the kinase domain inhibitor. One step curves in MEF-WT and PERK-KO cells showed no difference in GP1V, PSTV, and WR virus yield, however, plaque phenotype assays showed larger lysis plates in PERK-KO cells when compared to those formed in MEF-WT cells. The one-step curves performed in the presence of the BiP inhibitor showed no difference in VACV-Br productivity, however, in the plaque phenotype, it is possible to observe smaller size lysis plates in the wells treated with the inhibitor. qPCR assays have shown that infection with GP1V, PSTV and WR viruses regulates the expression of genes responsive to the UPR pathway. In conclusion, ATF6 seems to have an important role during VACV-Br infection. The three viruses efficiently multiplied in cells deficient for the PERK sensor. The IRE1 kinase domain plays an important role in the replication of GP1V, PSTV and WR viruses. | pt_BR |
dc.description.resumo | A família Poxviridae possui representantes mundialmente conhecidos que infectam uma gama de hospedeiros vertebrados e invertebrados, incluindo os seres humanos. Os poxvírus são divididos em duas subfamílias, a Entomopoxvirinae, a qual inclui os poxvírus que infectam insetos, e a Chordopoxvirinae, que compreende os poxvírus que infectam vertebrados. A subfamília Chordopoxvirinae possui atualmente dezoito gêneros, e o gênero Orthopoxvirus está entre os mais estudados. Desde 1999 o Vaccinia virus (VACV) tem sido relacionado a surtos envolvendo seres humanos, bovinos, equinos e outros animais. A partir de diversos estudos realizados por pesquisadores brasileiros, os isolados de VACV brasileiros (VACVbr) foram divididos em dois grupos: grupo 1 (menos virulento em modelos de infecção murina), grupo 2 (mais virulento em modelos de infecção murina). A multiplicação dos poxvírus está intimamente relacionada ao reticulo endoplasmático (RE), e as fabricas virais produzidas durante a replicação são envoltas por suas membranas. Além disso, a obtenção da conformação tridimensional correta de proteínas ocorre em sua maioria no lúmen do RE. Por consequência, esta organela é capaz de responder a perturbações ocasionadas pelo acúmulo de proteínas mal dobradas, levando ao processamento adequado dessas proteínas ou até a morte celular programada, através da via de resposta a proteínas mal-dobradas (Unfolded Protein Response – UPR). Esta via possui três sensores principais, que incluem as proteínas ATF6, IRE1 e PERK. A via UPR tem papel crucial na resposta imune, relacionando-se com a maturação e diferenciação de células imunitárias, além da produção de citocinas. Sendo assim, a modulação da via UPR teria papel importante na resposta imune do hospedeiro pela infecção por poxvírus. Neste trabalho, investigamos os efeitos da infecção pelos isolados de VACV brasileiros Guarani P1 virus (GP1V) e Passatempo virus (PSTV), sobre a ativação dos sensores da via UPR em comparação ao VACV Western Reserve protótipo do gênero. Os ensaios de gene repórter nos mostraram a ativação de ATF6 após a infecção pelos VACVbr. Nas curvas de ciclo único e múltiplos ciclos não foi possível observar diferença na produtividade desses vírus na ausência ou presença de ATF6; entretanto por fenótipo de placa é possível observar que nas células ATF6-WT as placas de lise são menores quando comparadas com as placas formadas nas células ATF6-KO. Através do ensaio de RFLP verificamos que a infecção pelos três vírus analisados modula negativamente o processamento do mRNA de XBP1, alvo de IRE1. A avaliação do fenótipo de placa na presença dos inibidores do domínio cinase e Rnase de IRE1, nos mostrou diminuição da placa de lise dos VACV-Br na presença do inibidor do domínio cinase. Curvas de ciclo único em células MEF-WT e PERK-KO não nos mostraram diferença na produtividade dos vírus GP1V, PSTV e WR, contudo os ensaios de fenótipo de placa nos mostraram placas de lise maiores nas células PERK-KO quando comparadas as formadas nas células MEF-WT. As curvas de ciclo único realizadas na presença do inibidor de BiP não nos mostraram diferença na produtividade dos VACV-Br, entretanto no ensaio de fenótipo de placa é possível observar placas de lise de tamanho menor nos poços tratados com o inibidor. Ensaios de qPCR mostraram que a infecção pelos vírus GP1V, PSTV e WR regula a expressão de genes responsivos a via UPR. Concluindo, ATF6 parece ter papel importante durante a infecção dos VACV-Br; os três vírus multiplicaram eficientemente nas células deficientes para o sensor PERK e o domínio cinase de IRE1 tem papel importante na replicação dos vírus GP1V, PSTV e WR. | pt_BR |
dc.description.sponsorship | CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico | pt_BR |
dc.description.sponsorship | FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais | pt_BR |
dc.description.sponsorship | CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior | pt_BR |
dc.language | por | pt_BR |
dc.publisher | Universidade Federal de Minas Gerais | pt_BR |
dc.publisher.country | Brasil | pt_BR |
dc.publisher.department | ICB - DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA | pt_BR |
dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Microbiologia | pt_BR |
dc.publisher.initials | UFMG | pt_BR |
dc.rights | Acesso Aberto | pt_BR |
dc.subject | VACV | pt_BR |
dc.subject | GP1V | pt_BR |
dc.subject | PSTV | pt_BR |
dc.subject | WR | pt_BR |
dc.subject | UPR | pt_BR |
dc.subject.other | Microbiologia | pt_BR |
dc.subject.other | Infecções por poxviridae | pt_BR |
dc.subject.other | Vírus vaccinia | pt_BR |
dc.subject.other | Resposta a proteínas não dobradas | pt_BR |
dc.title | Interação vírus-hospedeiro: a ativação de componentes da via de resposta a proteínas mal dobradas (UPR) pelos Vaccinia virus Guarani P1 (GP1V) e Passatempo (PSTV) | pt_BR |
dc.type | Tese | pt_BR |
dc.identifier.orcid | https://orcid.org/0000-0001-6090-4253 | pt_BR |
Aparece en las colecciones: | Teses de Doutorado |
archivos asociados a este elemento:
archivo | Descripción | Tamaño | Formato | |
---|---|---|---|---|
Karine_TESE_VERSÃO BIBLIOTECA ok.pdf | 4.79 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |
Los elementos en el repositorio están protegidos por copyright, con todos los derechos reservados, salvo cuando es indicado lo contrario.