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http://hdl.handle.net/1843/40506
Full metadata record
DC Field | Value | Language |
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dc.contributor.advisor1 | Armando da Silva Cunha Júnior | pt_BR |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/8278273904187275 | pt_BR |
dc.contributor.referee1 | Gisele Rodrigues da Silva | pt_BR |
dc.contributor.referee2 | Frederico Pittella da Silva | pt_BR |
dc.contributor.referee3 | Caryne Margotto Bertollo | pt_BR |
dc.contributor.referee4 | Anna Elisa Maciel de Faria Mota Oliveira | pt_BR |
dc.creator | Marcela Coelho Silva Ribeiro | pt_BR |
dc.creator.Lattes | http://lattes.cnpq.br/9149870143911454 | pt_BR |
dc.date.accessioned | 2022-03-28T18:37:16Z | - |
dc.date.available | 2022-03-28T18:37:16Z | - |
dc.date.issued | 2019-05-29 | - |
dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/1843/40506 | - |
dc.description.abstract | Desde que o silenciamento de genes específicos relacionados a doenças na retina tornou-se uma realidade com o uso de pequenos RNAs interferentes (do inglês, small interfering RNAs – siRNAs), essa tecnologia tem sido amplamente estudada para promover o tratamento ou até mesmo a cura de distúrbios oculares de origem genética. Apesar dos recentes avanços, o sucesso clínico do silenciamento gênico na retina é significativamente limitado por barreiras anatômicas e fisiológicas do olho. Além disso, as moléculas de siRNA não conseguem atravessar livremente as membranas celulares em função de seu peso molecular e carga negativa. Com base no exposto, o objetivo deste trabalho foi desenvolver um nanocarreador à base de lipídios (lipoplex), estrategicamente revestido com ácido hialurônico (AH) para facilitar a internalização de siRNAs nas células da retina. Diferentes pesos moleculares de AH (8-15 kDa e 160-600 kDa) foram avaliados para a funcionalizar a superfície do lipoplex catiônico e as partículas obtidas foram caracterizadas por espalhamento dinâmico de luz e microscopia eletrônica de transmissão. O lipoplex catiônico evidenciou um diâmetro médio de 133,5 ± 1,2 nm e um potencial zeta de 71,1 ± 3,0 mV. Após a adição de AH (160-600 kDa), tanto o tamanho quanto o potencial zeta foram estatisticamente diferentes em comparação aos lipoplexes não modificados (p> 0,05), evidenciando um diâmetro médio de 221,8 ± 9,2 nm e um potencial zeta de - 34,2 ± 1,4 mV. Esses resultados associados à caracterização morfológica das nanopartículas indicaram uma ligação eletrostática entre o lipoplex e AH. Além disso, estudos in vitro e eletroforese foram realizados para verificar se o revestimento de AH poderia interferir na incorporação de siRNA no lipoplex e em sua eficácia. Os lipoplexes revestidos com AH não só protegeram o siRNA como também facilitaram sua internalização em células do epitélio pigmentado da retina, ARPE-19. Os resultados indicaram que o lipoplex modificado com AH foi capaz de introduzir as moléculas de siRNA (37,6 nM) nas células da retina sem apresentar uma citotoxicidade aparente. Diante disso, tanto a distribuiçao quanto a segurança do lipoplex catiônico e associado ao AH na retina foram investigadas em estudos in vivo. Ao contrário do lipoplex catiônico que não foi capaz de penetrar em camadas mais profundas da retina, o uso do lipoplex modificado com AH apresentou sinais do siRNA fluorescente em diferentes camadas da retina. Além disso, ambos os sistemas não demonstraram efeitos tóxicos à retina após 7 e 14 dias das injeções intravítreas, de acordo com a eletrorretinografia, avaliação clínica e histologia dos olhos de ratos da linhagem Wistar. Considerando todos os resultados, o lipoplex revestido por ácido hialurônico pode ser um sistema promissor para promover a proteção e o transporte do siRNA para a retina. | pt_BR |
dc.description.resumo | Since the possibility of silencing specific genes linked to retinal diseases has become a reality with the use of small interfering RNAs (siRNAs), this technology has been widely studied in order to promote the treatment or even the cure of genetic eye disorders. Despite the recent advances, the clinical success of gene silencing in the retina is significantly limited by inherent anatomical and physiological ocular barriers. Moreover, the siRNA molecules cannot freely cross cell membranes due to their relatively high molecular weight and negative charge. Therefore, this work aimed to develop a lipid-based nanocarrier (lipoplex) strategically coated with hyaluronic acid (HA) to penetrate vitreous space and facilitate siRNAs internalization into retinal cells. Different molecular weights of HA (8-15 kDa and 160-600 kDa) were evaluated for cationic lipoplex surface functionalization and the obtained particles were characterized by dynamic light scattering and transmission electron microscopy. Cationic lipoplex had a Z-average diameter of 133.5 ± 1.2 nm and zeta potential of 71.1 ± 3.0 mV. Upon addition of HA (160-600 kDa), both size and zeta potential were statistically different compared to non-modified lipoplexes (p>0.05), showing a Z-average diameter of 221.8 ± 9.2 nm and zeta potential of - 34.2 ± 1.4 mV. These results and morphological characterization indicated an electrostatic binding between lipoplex and HA. In addition, electrophoresis and in vitro studies were performed to evaluate if HA coating could interfere in siRNA incorporation into lipoplex and their efficacy. HA-coated lipoplexes could protect siRNA and also facilitate its internalization into a human retinal pigment epithelial cell line, ARPE-19. Our findings indicate that HA-lipoplexes were able to introduce siRNA molecules (37,6 nM) in retinal cells without apparent cytotoxicity. Based on this, in vivo retinal distribution and safety of cationic and HA-lipoplex were also investigated. In contrast to the cationic lipoplex that was not able to penetrate deeper retinal structures, HA-coated lipoplexes showed a clear localization of fluorescent siRNA signal in the inner and outer nuclear layer of retina. Moreover, both systems showed no toxic effects to the retina after 7 and 14 days of intravitreal injections, according to electroretinography, clinical evaluation, and histology of Wistar rat's eyes. Considering all the results, the lipoplex coated with hyaluronic acid may represent a promising approach to promote the protection and transport of the siRNA to the retina. | pt_BR |
dc.description.sponsorship | CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico | pt_BR |
dc.description.sponsorship | FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais | pt_BR |
dc.description.sponsorship | CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior | pt_BR |
dc.language | eng | pt_BR |
dc.publisher | Universidade Federal de Minas Gerais | pt_BR |
dc.publisher.country | Brasil | pt_BR |
dc.publisher.department | FARMACIA - FACULDADE DE FARMACIA | pt_BR |
dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas | pt_BR |
dc.publisher.initials | UFMG | pt_BR |
dc.rights | Acesso Aberto | pt_BR |
dc.subject | Lipoplex | pt_BR |
dc.subject | Small interfering RNA (siRNA) | pt_BR |
dc.subject | Hyaluronic acid | pt_BR |
dc.subject | Intravitreal injection | pt_BR |
dc.title | Lipoplex functionalization with hyaluronic acid for safe and efficient delivery of siRNA to the retina | pt_BR |
dc.title.alternative | Funcionalização das formulações de lipoplex com ácido hialurônico para uma liberação eficiente e segura de siRNA na retina | pt_BR |
dc.type | Tese | pt_BR |
Appears in Collections: | Teses de Doutorado |
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Lipoplex functionalization with hyaluronic acid for safe and efficient delivery of siRNA to the retina_tese_Marcela Ribeiro.pdf | 4.08 MB | Adobe PDF | View/Open |
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