New antigens for the serological diagnosis of human visceral leishmaniasis identified by immunogenomic screening

Abstract

A leishmaniose visceral (LV) ainda representa um grave problema de saúde pública no Brasil devido à ineficiência das medidas de controle atualmente empregadas, que incluíam diagnóstico precoce e tratamento de casos humanos, controle de vetores, eutanásia de cães infectados e, recentemente aprovado no Brasil, tratamento com o medicamento Milteforam. O manejo clínico eficaz depende em grande parte do diagnóstico precoce e inequívoco, no entanto, reações cruzadas também têm sido descritas em testes sorológicos, principalmente quando se trata de indivíduos provenientes de áreas onde a doença de Chagas também está presente. Assim, a descoberta de novos antígenos para aprimorar os testes sorológicos atuais para o diagnóstico de LV é uma necessidade urgente. Aqui, realizamos uma estratégia de triagem imunogenômica para identificar epítopos de células B lineares conservados no pro teoma previsto de L. infantum usando os seguintes critérios: i) proteínas expressas nos estágios encontrados no hospedeiro vertebrado, estágio amastigota e secretada/excretada , para garantir maior exposição do sistema imunológico; ii) divergente de proteínas presentes em outros patógenos de doenças infecciosas com incidência em áreas endêmicas para LV, como T. cruzi; iii) altamente antigênica para humanos com diferentes backgrounds genéticos, independentemente do estágio clínico da doença; iv) estável e adaptável a testes de controle de qualidade para garantir a reprodutibilidade; v) usar análise estatística para determinar um tamanho de amostra adequado para avaliar a precisão dos testes de diagnóstico estabelecidos pela estratégia de característica operacional do receptor. Selecionamos seis epítopos de células B lineares previstos de três proteínas do parasita L. infantum. Os resultados demonstraram que uma mistura de peptídeos (Mix IV: peptídeos 3+6) foi capaz de identificar casos de LV e simultaneamente discriminar infecções causadas pelo parasita T. cruzi com alta precisão (100,00%) e concordância perfeita (índice Kappa = 1.000 ) com métodos diretos realizados por laboratórios no Brasil. Os resultados também demonstraram que o peptídeo-6, Mix III (peptídeos 2+6) e I (peptídeos 2+3+6) são potenciais antígenos aptos a serem utilizados no diagnóstico de LV, representados pela alta acurácia (Ac = 99,52%, 99,52% e 98,56%, respectivamente). Este estudo representa uma interessante estratégia de descoberta de novos antígenos aplicados ao diagnóstico sorológico que contribuirão para o aprimoramento do diagnóstico da LV e, consequentemente, poderão auxiliar na prevenção, controle e tratamento da doença em áreas endêmicas do Brasil.