Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9ABH34
metadata.dc.type: Dissertação de Mestrado
Title: Aavaliação in vitro do perfil fenotípico de cultura primária de macrófagos frente à infecção pela linhagem selvagem T1 e seu mutante linhagemCP13 de Corynebacterium pseudotuberculosis
metadata.dc.creator: Rachid Aref El Aouar Filho
metadata.dc.contributor.advisor1: Vasco Ariston de Carvalho Azevedo
metadata.dc.contributor.advisor-co1: Alfonso Gala Garcia
metadata.dc.contributor.referee1: Flavio Guimaraes Fonseca
metadata.dc.contributor.referee2: Liliane Martins dos Santos
metadata.dc.description.resumo: Corynebacterium pseudotuberculosis é uma bactéria Gram-positiva pertencente à Classe das Actinobactérias. Esta bactéria é um patógeno intracelular facultativo causadora da patologia Linfadenite Caseosa (LC) em ovinos e caprinos. Durante o processo de infecção estas bactérias são contidas por células da resposta imune inata, sendo as principais células efetoras dessa defesa os neutrófilos e macrófagos. Este trabalho foi proposto com o intuito de avaliar a resposta de macrófagos murinos derivados de monócitos de medula, in vitro, em infecção por C. pseudotuberculosis linhagem CP13, um mutante para um gene relacionado ao transporte de ferro em Corynebacterium diphtheriae, que gerou bons níveis de proteção em subsequentes desafios contra C. pseudotuberculosis, e observar o perfil de resposta gerado por essas culturas. Este tipo de caracterização possibilita inferir a participação da resposta imune inata na ação contra infecções desta bactéria. Com os resultados obtidos neste trabalho, conseguimos observar que esta bactéria é responsável por diminuir a viabilidade das culturas de macrófagos em uma proporção que depende da concentração de bactérias inoculadas nas culturas de células. A infecção, em macrófagos, por C. pseudotuberculosis, foi responsável por ativar a produção de óxido nítrico (NO) e induzir a atividade da enzima arginase I, além de mostrar que este aumento da produção de NO e atividade da enzima arginase I estão relacionados ao aumento da expressão do RNAm para a enzima Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) e arginase I. Nossos resultados mostram, também, que a linhagem CP13 não induz a produção de ROS e que comparada com a linhagem T1, linhagem selvagem do qual foi derivada a linhagem CP13, induz maior produção da citocina IL-10 e menos TNF-, em macrófagos. Com estes dados, pudemos inferir que a linhagem CP13 apresenta um perfil similar de ativação dos macrófagos, quando comparados com a linhagem T1. Entretanto houve diferença no perfil de citocinas induzidas por infecção em macrófagos pelas linhagens T1 e CP13, onde está última induziu mais IL-10 (citocina associada a um perfil de maior susceptibilidade a infecções microbianas).
Abstract: Corynebacterium pseudotuberculosis is a Gram-positive bacterium that belongs to the class Actinobacteria. This bacterium is a facultative intracellular pathogen that causes the disease caseous lymphadenitis (CL) in sheep and goats. During the process of infection by these bacteria are contained cells of the innate immune response, among which the main effectors defensives cells are neutrophils and macrophages. This work has been proposed with the aim of assessing the response of murine bone marrow monocyte-derived macrophages in in vitro infection with the CP13 strain of C. pseudotuberculosis - a knockout mutant for a gene related to the transportation of iron in Corynebacterium diphtheriae that generated good levels of protection against subsequent infections C. pseudotuberculosis - and observe the response profile generated by these cultures. This type of characterization allows the inference of the involvement of innate immune response against infections caused by this bacterium. So far, it was observed that this bacterium is responsible for diminishing the viability of the macrophage cultures in a ratio which depends on the concentration of bacteria inoculated in the cell cultures. The infection of macrophages by C. pseudotuberculosis was responsible for triggering the production of nitric oxide (NO) and inducing the activity of the enzyme arginase I. Also, it showed that the increase in the production of NO and in the activity of the enzyme arginase I are associated with increased expression of the enzyme Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) and arginase I mRNA. The results also show that strain CP13 does not induce the production of ROS and, compared to the strain T1 - wild-type strain from which the CP13 strain was derived; it induces increased production of the cytokine IL-10 and decreased production of TNF- in macrophages. With these data, it could be infered that the strain CP13 has a similar profile of activation of macrophages compared to the strain T1. However, there was no difference in the profile of cytokines induced in macrophages by infection by strains T1 and CP13, in which the latter induced more IL-10 (cytokine profile associated with an increased susceptibility to microbial infection).
metadata.dc.subject.other: Corynebacterium pseudotuberculosis
Macrófagos
Oxído nítrico
Arginase
PCR quantitativa
Genética
Espécies reativas de oxigênio
Citocinas
metadata.dc.language: Português
Publisher: Universidade Federal de Minas Gerais
metadata.dc.publisher.initials: UFMG
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
URI: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9ABH34
Issue Date: 8-Nov-2012
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