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Type: Tese de Doutorado
Title: Avaliação do HER2 em câncer de mama: estudo das fases pré-analítica, analítica e pós-analítica das técnicas de imuno-histoquímica e hibridização in situ pela prata usando microarranjos de tecido
Authors: Cristiana Buzelin Nunes
First Advisor: Helenice Gobbi
First Co-advisor: Rafael Malagoli Rocha
First Referee: Agostinho Pinto Gouveia
Second Referee: Luciene Simoes de Assis Tafuri
Third Referee: Marina De Brot Andrade
metadata.dc.contributor.referee4: Vanessa Fortes Zschaber Marinho
Abstract: OBJETIVOS: Analisar a influência do controle da fase pré-analítica (CFPA) na imuno-histoquímica (IHQ) para a expressão do HER2; determinar a sensibilidade e especificidade de anticorpos anti-HER2 comparando com a hibridização in situ (DDISH); comparar as metodologias de IHQ automatizada e manual e as análises visuais das reações de IHQ através de microscopia óptica (OM) e de imagem escaneada (WSI), para o HER2 no câncer de mama. MATERIAL E MÉTODOS: TMA contendo 200 carcinomas mamários (100 com e 100 sem CFPA) foram submetidos à IHQ (SP3, CB11, 4B5, HercepTestTM e A0485) e DDISH. A IHQ foi realizada por método manual (polímero Novolink) e automatizado (Benchmark®). As reações foram escaneadas e analisadas através de MO e WSI (Pannoramic Viewer, 3DHISTECH) segundo o guia ASCO/CAP. RESULTADOS: 184 casos foram analisados pela IHQ e DDISH. Os casos com CFPA mostraram maior sensibilidade e especificidade dos anticorpos. Os casos com CFPA vs sem CFPA mostraram sensibilidade de 88,5 vs 87,2 (CB11) a 100 vs 94,7 (A0485), e especificidade de 95,2 vs 95,1 (A0485) a 98,1 vs 95,8 (CB11). 4B5 mostrou sensibilidade maior nos casos sem CFPA (96,1 vs 97,4). A concordância entre os anticorpos foi muito boa (kappa: 0,82 a 0,9). A concordância global entre IHQ e DDISH variou de 94,1% (CB11) a 96,6% (A0485). A0485, HercepTestTM, SP3 e 4B5 mostraram sensibilidade e especificidade >95%. CB11 foi o mais específico (97,1%). 60% (CB11) a 83.3% (SP3) dos casos 2+ não mostraram amplificação gênica. Os casos falso negativos variaram de 0,5% (A0485) a 3,8% (CB11), e os falso positivos, de 1,6% (CB11) a 2,7% (HercepTestTM, SP3 e 4B5). A concordância entre os métodos manual (M) e automatizado (A) foi boa (A0485, k=0,73) a muito boa (SP3, k=0,89 e CB11, k=0,85). O método A mostrou maior sensibilidade do A0485 (M=85,0 vs A=98,4) e SP3 (M=92,3 vs A=97,0) e menor sensibilidade do CB11 (M=94,1 vs A=89,0). A especificidade do CB11 aumentou (M=92,3 vs A=97,1) e dos outros anticorpos diminuiu (A0485, M=96,4 vs A=95,3 e SP3, M=96,4 vs A=95,2). A concordância das análises WSI e OM foi boa (SP3, k=0,80) a muito boa (CB11-HercepTestTM, k=0,81). A análise WSI mostrou maior sensibilidade (100-SP3-HercepTestTM a 97-CB11), e menor especificidade (86,4-SP3 a 89,4-HercepTestTM) comparada com OM (sensibilidade de 92,1-CB11 a 98- SP3 e especificidade de 95,2- SP3-HercepTestTM a 97,1-CB11-SP3). CONCLUSÕES: Os casos com CFPA mostraram maior sensibilidade e especificidade dos anticorpos, exceto o 4B5. Houve concordância muito boa entre os anticorpos anti-HER2. CB11 foi o anticorpo mais específico, mas teve mais casos falso negativos. O A0485, SP3, 4B5 e HercepTestTM mostraram sensibilidade e especificidade elevadas, mas tiveram mais casos falso positivos. As concordâncias entre os dois métodos IHQ e entre as avaliações por WSI e OM foram consideradas boas a muito boas, com alta sensibilidade e especificidade dos anticorpos utilizando-se ambos os métodos de avaliação.
Abstract: AIMS: To investigate the influence of preanalytical phase control (PAPC) for assessment of immunohistochemistry (IHC) HER2 expression against in situ hybridization (DDISH); to compare automated and manual IHC methodologies, and visual evaluations of the IHC assays through optical microscopy (OM) and whole slide imaging (WSI), for HER2 expression in breast cancer. MATERIALS AND METHODS: TMAs containing 200 breast carcinomas (100 with and 100 without PAPC) were submitted to DDISH and IHC (five anti-HER2 antibodies: SP3, CB11 4B5, HercepTestTM and A0485) applying manual (Novolink Polymer) and automated (Benchmark®) methods. Slides were scanned (3DHISTECH) and evaluated visually using OM and WSI on computer screen (Pannoramic MIDI and Viewer) following ASCO/CAP guidelines. RESULTS: 184 cases were assessed by IHC and DDISH. Cases with PAPC showed higher sensitivity and specificity of the antibodies. Sensitivity and specificity of cases with PAPC versus cases without PAPC ranged from 88.5 vs 87.2 (CB11), to 100 vs 94.7 (A0485); and 95.2 vs 95.1 (A0485), to 98.1 vs 95.8 (CB11). 4B5 antibody showed higher sensitivity in cases without PAPC (96.1 vs 97.4). The concordance among antibodies was very good (k=0.82 to 0.9). The overall concordance between IHC and DDISH was 94.1% (CB11) to 96.6% (A0485). A0485, HercepTestTM, SP3 and 4B5 were over 95% sensitive and specific. CB11 was the most specific antibody (97.1%). 60% (CB11) to 83.3% (SP3) of the 2+ cases showed no gene amplification. False negative cases varied from 0.5% (A0485) to 3.8% (CB11), and false positive from 1.6% (CB11) to 2.7% (HercepTest, SP3 and 4B5). The concordance of the antibodies applying both IHC methods was good (A0485, k=0.73) to very good (SP3, k=0.89 and CB11, k=0.85). Comparing automated (A) and manual (M) methodologies, there was a higher sensitivity of A0485 (M=85.0 vs A=98.4) and SP3 (M=92.3 vs A=97.0) and a lower specificity (A0485, M=96,4 vs A=95,3 e SP3, M=96,4 vs A=95,2). CB11 showed higher sensitivity (M=94.1 vs A=89.0) by applying the M methodology and a higher specificity by applying the A methodology (M=92.3 vs A=97.1). Assessment of WSI and OM agreement was good (SP3, k=0.80) to very good (CB11 and HercepTestTM, k=0.81). WSI evaluation led to a higher sensitivity (100-SP3-HercepTestTM to 97-CB11), and a lower specificity (86.4-SP3 to 89.4-HercepTestTM) compared to OM evaluation (sensitivity 92.1-CB11 to 98-SP3; specificity 95.2-SP3-HercepTestTM to 97.1-CB11-SP3). CONCLUSIONS: Cases with PAPC showed a higher sensitivity and specificity for all antibodies, but 4B5. There was a very good agreement among the five anti-HER2 antibodies. CB11 was the most specific antibody, but showed more false negative cases. A0485, SP3, 4B5 and HercepTest were highly sensitive and specific, but showed more false positive cases. The agreement between both IHC methods and between WSI and OM analysis was good to very good. The antibodies were highly sensitive and specific using both methods of evaluation.
Subject: Carcinoma ductal de mama
Hibridização in situ
Estudo comparativo
Microscopia
Patologia
Imunoistoquímica
Sensibilidade e especificidade
Imagem óptica
Receptor erb B-2
language: Português
Publisher: Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials: UFMG
Rights: Acesso Aberto
URI: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9FYG8J
Issue Date: 18-Dec-2013
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