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http://hdl.handle.net/1843/BUOS-97YG7V| Type: | Dissertação de Mestrado |
| Title: | Isolamento e caracterização de células-tronco/progenitoras a partir de cultivo in vitro de linhagens celulares de carcinoma de mama humana |
| Authors: | Milene Pereira Moreira |
| First Advisor: | Luciana Maria da Silva Siqueira |
| First Co-advisor: | Geovanni Dantas Cassali |
| First Referee: | Geovanni Dantas Cassali |
| Second Referee: | Dawidson Assis Gomes |
| Third Referee: | Leticia da Conceicao Braga |
| Abstract: | O câncer de mama é o segundo tipo de câncer mais frequente no mundo e o mais comum entre as mulheres. É um grupo heterogêneo de neoplasias, possivelmente devido à existência de uma pequena subpopulação de células nesses tumores com propriedades de células-tronco, denominadas células-tronco do câncer (CSCs). A teoria da CSCs propõe uma organização hierárquica de células dentro do tumor, em que as CSCs são responsáveis por sustentar o crescimento do tumor , pela resistência do tumor a terapias convencionais e recorrência da doença. Células com características funcionais de células-tronco/progenitoras podem ser isoladas de células mamárias e propagadas in vitro como esferas não aderentes, denominadas mamoesferas. Sendo assim, esse trabalho teve como objetivo caracterizar linhagens celulares humanas de carcinoma de mama BT-549 e Hs 578T, mamoesferas-derivadas obtidas a partir delas cultivadas in vitro em substratos plásticos (2D) e em sistema tridimensional (Matrigel). Para isso foi feito caracterização por microscopia óptica (Faloidina/DAPI, Image it, -tubulina, E-caderina e VE-caderina) e por citometria de fluxo (CD90, CD146, CD105, CD31, CD34, CD45 e CD24) e, análise do perfil de expressão por qRT -PCR dos genes ERBB2, KRT5, MKI67, CDH3 e TP63. Os resultados obtidos mostram que ambas as linhagens celulares cultivadas em 2D e em 3D, expressam -tubulina, com exceção da linhagem Hs 578T cultivada em 3D, e não expressão E-caderina e VE-caderina. A imunofenotipagem classificou a linhagem BT-549 como CD90+ /CD146+/CD105+/CD31-/CD34-/CD45-/CD24+e a linhagem Hs 578T como CD90+/CD146+/CD105+/CD31-/CD34-/CD45-/CD24-. As linhagens celulares cultivadas em Matrigel formaram estruturas tridimensionais e apresentaram uma expressão diferencial dos genes analisados em comparação com as linhagens cultivadas em 2D. Sob condições indiferenciadas essas células formaram mamoesferas -derivadas, sendo que a linhagem celular BT-549 apresentou melhor resultado. As mamoesferas-derivadas e as mamoesferas cultivadas em 3D apresentaram expressão de -tubulina e ausência de expressão de E-caderina e VE-caderina. A análise de expressão gênica mostrou que as mamoesferas-derivadas apresentam expressão diferencial dos genes estudados quando comparadas as linhagens parentais, sugerindo indícios da participação desses genes na formação das mamoesferas. Em cultivo 3D, as mamoesferas parecem sofrer diferenciação e apresentam uma expressão diferencial dos genes analisados em relação às mamoesferas-derivadas das linhagens celulares. Com base nos nossos resultados, a BT-549 parece ser um bom modelo de estudo in vitro das CSCs, sendo os genes ERBB2 e TP63 potenciais marcadores para as CSCs. |
| Abstract: | Breast cancer is the second most common type of cancer worldwide and the most common among women. It is a heterogeneous disease, possibly due to the existence of a small population of cells in these tumors with stem cell properties, known as cancer stem cells (CSCs). The CSCs hypothesis proposes a hierarchical organization of cells within the tumor where only the CSCs has the ability of sustain tumor growth, resistance to conventional therapies and disease recurrence.Cells with function characteristic of progenitor/stem cell can be prospectively isolated and propagated in vitro as non-adherent spheres, termed mammospheres. Therefore, this study aimed to characterize human cell lines of breast carcinoma BT-549 and Hs 578T , mammospheres-derived from the cell lines cultured in vitro in plastic substrate and in three -dimensional system (Matrigel). For this was made characterization by optical microscopy (Phaloidin/DAPI, Imageit, -tubulin, E-cadherin and VE-caherin) and by flow cytometry (CD90, CD146, CD105, CD31, CD34, CD45 e CD24) and, analysis of expression profile by qRT -PCR of the genes ERBB2, KRT5, MKI67, CDH3 e TP63. The results obtained showed that both cell lines cultured in 2D and in 3D, express -tubulin, with the exception of Hs 578T cell line cultured in 3D, and do not express E -cadherin and VE-cadherin. The immunophenotype classified the BT-549 cell line as CD90+/CD146+/CD105+/CD31-/CD34-/CD45-/CD24+ and the Hs 578T cell line as CD90+/CD146+/CD105+ /CD31-/CD34-/CD45-/CD24-. Both cell lines cultured in Matrigel can form three-dimensional structures and presented a differentiated expression of the genes analyzed when compared with the cell lines cultured in 2D. Under undifferentiating condition s these cell lines form mammospheres-derived, being that the cell line BT -549 demonstrated a better result. The mammospheres-derived and the mammosphere cultured in 3D showed expression of -tubulin and no expression of E-cadherin and VE-cadherin. The gene expression analysis showed that the mammosphere-derived presented a differentiated expression of the genes studied when compared with the parental cell lines, suggesting cues of the participation of these genes in the formation of mammospheres. In 3D culture the mammospheres seems undergoes differentiation and presented a differentiated expression of the genes analyzed compared with the mammosphere - derived from the cell lines. Based in our results, the cell line BT-549 look like a good model to study in vitro the CSCs, being the genes ERBB2 and TP63 potential markers of CSCs. |
| Subject: | Células-tronco Neoplasias da mama Imagem tridimensional Células-tronco neoplásicas Células Cultura e meios de cultura Linhagem celular tumoral Mama Câncer Expressão gênica |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUOS-97YG7V |
| Issue Date: | 8-Mar-2013 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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