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dc.contributor.advisor1Almir de Sousa Martinspt_BR
dc.contributor.advisor-co1Luciana Moropt_BR
dc.contributor.advisor-co2Almir de Sousa Martinspt_BR
dc.contributor.referee1João Carlos Pereira da Silvapt_BR
dc.contributor.referee2Paulo Lourenço da Silvapt_BR
dc.contributor.referee3Nelson Rodrigo da Silva Martinspt_BR
dc.creatorJanaina de Jesus Batistapt_BR
dc.date.accessioned2019-08-10T18:11:03Z-
dc.date.available2019-08-10T18:11:03Z-
dc.date.issued2007-04-13pt_BR
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/1843/ECJS-76RG9Z-
dc.description.abstractThe Infectious Bursal Disease (IBD) is caused by a birnavirus (IBDV) and is an acute and highly contagious chicken disease. The immunosuppression commonly seen in this disease is related to the fact that IBDV induces apoptosis in chicken lymphocytes. The objective of this work was to evaluate the expression of the genes of caspases 3 and 8, Bcl-2, viral protein VP2, enzyme Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase (GAPDH) and S26, together with the analysis of the early occurrence of apoptosis. Twenty and nine SPF one day old chicks were inoculated with the IBDV. The animals were splitted in 5 groups: 1-control; 2 the 5- with 24, 48, 72 and 96 hours after inoculation, respectively. After each experimental interval, the animals were weighed, killed and submitted to the necropsy. Fragments of the BF were collected for histological analysis and for RNA extration with posterior reverse transcription. The cDNA obtained were used for amplification in Real-time PCR using a SYBR GREEN PCR kit, in ABI Prism 7000 SDS. Histological sections were stained with HE, TUNEL and in Gomori Trichrome and evaluated by morphometry, in order to obtain an apoptotic index and to determinate a parenchyma/stroma ratio. The apoptotic indices increased gradually, indicating a relation with bursal atrophy caused by IBDV. Also, parenchyma/stroma ratios in infected groups decreased when compared with the control group. Lymphoid tissues were substituted by fibrous connective tissue, indicating atrophy. Expression of the Bcl-2 gene decreased along the experiment and did not show differences between the Control and 24 hours p.i groups and also between 72 hours p.i and 96 hours p.i. The expression of caspase 3 showed to a peak 24 hours p.i and then dropped 48 hours p.i, remaining itself without a significant difference in 48, 72 and 96 hours p.i. Caspase 8 showed an expression peak 48 hours p.i. Therefore IBDV intervenes with the expression of genes that control apoptosis. Furthermore the results of the real time PCR demonstrated decreased viral load in lymphoid cells of bursa in the different intervals of the experiment. The genes for the targets GAPDH and S26, although constituent, showed an intense variation in the expression and then were discarded as normalizators of real time PCR. The results showed that apoptosis is an early event occurring soon after the viral inoculation, indicating that is more than a simple mechanism for the immunosuppression and bursal atrophy in the IBD. Also IBDV replication seems to cause a significant alteration of the expression of the target genes.pt_BR
dc.description.resumoA Doença Infecciosa da Bursa de Fabrício (DIB) é causada por um birnavírus (VDIB) sendo uma infecção aguda e altamente contagiosa de aves galináceas. A imunossupressão vista nesta doença está vinculada ao fato do vírus induzir apoptose em linfócitos em galinhas. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a expressão dos genes das caspases 3 e 8, bcl-2, proteína viral VP2, enzima Gliceraldeído Fosfato Dehidrogenase (GAPDH) e S26, juntamente com a análise da ocorrência precoce da apoptose. Vinte e nove pintos SPF de um dia foram inoculados com o VDIB. Os animais foram divididos em 5 grupos: 1-controle; 2 a 5- com 24, 48, 72 e 96 horas pós inoculação, respectivamente. Após cada intervalo experimental, os animais foram pesados e eutanasiados e submetidos à necropsia. Fragmentos da BF foram colhidos para análise histológica e para a extração de RNA e transcrição reversa e posterior amplificação pela real-time PCR com o uso do kit SYBR GREEN PCR, sendo a reação desenvolvida em ABI Prism 7000 SDS. Lâminas coradas em HE, TUNEL e em Tricrômico de Gomori foram utilizadas na morfometria do índice apoptótico e na determinação da relação parênquima/estroma. Os índices apoptóticos cresceram progressivamente, indicando uma relação na atrofia bursal causada pelo vírus da doença infecciosa da Bursa de Fabricius (VDIB). Paralelamente, houve uma diminuição da relação parênquima/estroma nos grupos infectados quando comparados ao grupo controle. Ainda que de forma discreta, houve uma substituição do tecido linfóide por tecido conjuntivo fibroso, caracterizando a hipotrofia do órgão. A expressão do Bcl-2 mostrou uma queda ao longo dos intervalos de tempo, não diferindo somente entre os grupos controle e 24 horas p.i e entre 72 horas p.i e 96 horas p.i. A expressão da caspase 3 mostrou um pico 24 horas p.i e uma queda 48 horas p.i, mantendo-se sem diferença significativa em 48, 72 e 96 horas p.i. A caspase 8 mostrou um pico de expressão 48 horas p.i. Pode concluir que o VDIB interfere junto a expressão de genes que controlam a apoptose. Paralelamente, os resultados da PCR em tempo real demonstraram queda da carga viral nas células linfóides da bursa nos diferentes intervalos de tempo do experimento. Os genes para os alvos GAPDH e S26, apesar de constitutivos, mostraram uma variação na expressão de forma muita intensa e tiveram que ser descartados como normalizadores das reações de PCR em tempo real. Os resultados sugerem que a apoptose é um evento presente já nos momentos mais precoces após a inoculação viral, sendo portanto mais que um simples mecanismo para a imunossupressão e atrofia bursal na DIB e que a replicação do VDIB leva a uma alteração significativa da expressão dos genes-alvo.pt_BR
dc.languagePortuguêspt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de Minas Geraispt_BR
dc.publisher.initialsUFMGpt_BR
dc.rightsAcesso Abertopt_BR
dc.subjectReal-time RT-PCRpt_BR
dc.subjectCaspases 3 e 8pt_BR
dc.subjectBcl-2pt_BR
dc.subjectBursa de Fabriciuspt_BR
dc.subjectS26pt_BR
dc.subjectApoptosept_BR
dc.subjectGAPDHpt_BR
dc.subjectVDIBpt_BR
dc.subject.otherInoculações seriadaspt_BR
dc.subject.otherImunossupressãopt_BR
dc.subject.otherVírus da doença infecciosa da bursapt_BR
dc.subject.otherCaspase 8pt_BR
dc.subject.otherCaspase 3pt_BR
dc.subject.otherBirnaviridaept_BR
dc.subject.otherDoenças transmissíveispt_BR
dc.subject.otherApoptosept_BR
dc.subject.otherGenes bcl-2pt_BR
dc.titleAnálise morfométrica e da expressão de genes na apoptose induzida pelo vírus da doença de Gumboropt_BR
dc.typeTese de Doutoradopt_BR
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