Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/1843/34674
Type: Tese
Title: Requerimento de receptores scavenger na sinalização via TLR4 para a produção de óxido nítrico por macrófagos estimulados com LPS: papel na ativação de IRF-3 e STAT-1
Authors: Nina Marí Gual Pimenta de Queiroz
First Advisor: Maria de Fátima Martins Horta
First Co-advisor: Luciana Souza de Oliveira
First Referee: RicardoTostes Gazzineli
Second Referee: Aristóbolo Mendes da Silva
Third Referee: Fernando de Queiroz Cunha
metadata.dc.contributor.referee4: André Luiz Barbosa Báfica
Abstract: O óxido nítrico (NO) é uma molécula versátil com efeitos tanto tóxicos quanto regulatórios. Em macrófagos, o papel antimicrobiano do NO é, até a data, o mecanismo letal ou inibitório mais evidente, descrito para um grande número de microrganismos, devido aos seus efeitos diretos e indiretos. O papel do TLR4 na transcrição de iNOS induzida por LPS está relacionado à inicialização de um complexo de sinalização celular que induz a produção da citocina IFN-β, a síntese de IRF-1 e a ativação de NF-kB e STAT-1, fatores de transcrição necessários para a síntese de iNOS. A absorção de uma concentração elevada de LPS (1 ug/ml) é mediada pelo receptor Scavenger (SR-A), com a participação de CD14, atuando em conjunto com o receptor TLR4 nas respostas inflamatórias ao LPS. A literatura sobre a sinalização de SR-A em macrófagos é restrita e muitas vezes contraditória. Os mecanismos pelos quais o LPS promove a interação do SR-A com TLR4 e suas vias de sinalização precisam ser melhor compreendidos. O principal objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do estímulo de LPS na via de TLR4 associada ao SR-A para a produção de NO em macrófagos peritoneais de camundongos C57BL/6. Nossos experimentos confirmam que os camundongos TLR4 knockout não produzem NO quando estimulados apenas com LPS, mas a adição conjunta de LPSe IFN-β restaura a capacidade destes macrófagos de expressar iNOS e produzir NO. Estes resultados sugerem que o LPS pode estimular os macrófagos por outro receptor diferente do TLR4. A inibição de SR-A usando DSS ou anticorpo neutralizante anti-SR-A mostrou que a associação entre SR-A e TLR4 é essencial para a expressão de iNOS e a produção de NO. Os nossos resultados comprovam que TLR4 e SR-A atuam em conjunto principalmente na ativação da via TLR4-TRIF para a produção de IFN-β e, consequentemente, promovendo a síntese de STAT-1 e de IRF-1, que agem em conjunto para ativar a produção de NO em macrófagos.
Abstract: Nitric oxide (NO) is a versatile molecule with both toxic and regulatory effects. In macrophages, the antimicrobial role of NO is, to date, the most evident, and several lethal or inhibitory mechanisms for a number of microorganisms, due to both direct and indirect effects, have been described. The role of TLR4 in the LPS-induced transcription of iNOS is due to the initiation of a complex cellular signaling that leads to production of the cytokine IFN-β, synthesis of IRF-1 and activation of NF-κB and STAT-1, transcription factors required for iNOS synthesis. The uptake of a high concentration of LPS (1 μg/ml) is mediated by Scavenger Receptor A (SR-A) with participation of CD14 and this receptor acts in concert with TLR4 to mediated LPS inflammatory responses. The literature on signaling SR-A in macrophages is small and often contradictory. Mechanisms by which LPS promotes SR-A interaction with TLR4 and her pathways need to be better understood. Then, our main goal in this study is evaluate the effect of LPS stimulus on TLR4 signaling pathway associated with SR-A to NO production by peritoneal macrophages from C57BL/6 mice. Our experiments confirm that TLR4 knockout mice don’t make NO when stimulated with LPS only, but the addition of IFN-β to the LPS stimulus restores the ability of these macrophages to express iNOS and produce NO. These results suggest that LPS could stimulate macrophages by another receptor different from TLR4. The inhibition of SR-A using DSS and neutralizing antibody shows that SR-A associated with TLR4 is essential for the expression of iNOS and NO production. Our results reinforce that TLR4 and SR-A acts in concert activating mainly TLR4-TRIF pathway for the production of IFN-β and consequently stimulating the synthesis of STAT-1 and IRF-1, they all together activate the NO production by macrophages.
Subject: Óxido nítrico
Receptor 4 toll-like
Receptores de lipopolissacarídeos
Óxido nítrico sintase
Receptores depuradores
Fator regulador 3 de interferon
Fator de transcrição STAT1
language: por
metadata.dc.publisher.country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials: UFMG
metadata.dc.publisher.department: ICB - DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E IMUNOLOGIA
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-Graduação em Bioquímica e Imunologia
Rights: Acesso Aberto
metadata.dc.rights.uri: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/
URI: http://hdl.handle.net/1843/34674
Issue Date: 3-Jun-2015
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