Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/1843/34825
Type: Tese
Title: Polimorfismos envolvidos no processos de resistência aos benzimidazóis em ancilostomídeos
Authors: Luis Fernando Viana Furtado
First Advisor: Élida Mara Leite Rabelo
First Co-advisor: Luciana Werneck Zuccherato
First Referee: Ricardo Toshio Fujiwara
Second Referee: Artur Kanadani Campos
Third Referee: Rubens Lima do Monte Neto
metadata.dc.contributor.referee4: Grasielle Caldas D'Avila Pessoa
Abstract: A administração em massa de benzimidazóis corresponde ao principal método de controle dos ancilostomídeos, entretanto, isso pode selecionar cepas de parasitos resistentes ao tratamento. Polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) nos códons 167, 198 e 200 do gene da β-tubulina isotipo 1 estão associados com resistência aos benzimidazóis em nematódeos. Para ancilostomídeos, a mutação no códon 167 nunca foi descrita, enquanto que as mutações nos códons 198 e 200 já foram descritas para esses helmintos, em baixa frequência na natureza. O objetivo desse trabalho foi investigar a participação de polimorfismos no gene da β-tubulina isotipo 1 no processo de resistência aos benzimidazóis em ancilostomídeos. Foi realizada uma varredura em busca dos SNPs canônicos relacionados à resistência em diferentes espécies de ancilostomídeos. Foram coletados vermes adultos de Ancylostoma braziliense e Ancylostoma caninum de cães naturalmente infectados de dois e de seis estados do Brasil, respectivamente, e ovos de Necator americanus provenientes de amostras fecais de humanos de seis estados do Brasil. Os códons 167 e 198 de A. caninum foram avaliados por ARMS-PCR e Tetraprimer ARMS-PCR, respectivamente (o códon 200 dessa espécie foi analisado em um trabalho anterior). Os códons de A. braziliense e N. americanus foram analisados por RFLP-PCR. Somente foram observadas as mutações no códon 198 de A. braziliense e N. americanus, com frequência de 1,2% e 1,4%, respectivamente, e no códon 200 de N. americanus, com frequência de 1,1%. No segundo momento, tendo em vista a baixa frequência desses SNPs na natureza e a possibilidade de existência de outros mecanismos relacionado com resistência, foi realizada a seleção de uma cepa resistente de Ancylostoma ceylanicum em hamsters, por meio de pressão seletiva de tratamento. Visto que não foram observados os SNPs canônicos no gene da β-tubulina dessa cepa, foi realizada a construção de uma minibiblioteca de cDNA do gene em questão de vermes resistentes. As análises mostraram três SNPs que não se repetiram entre as amostras. Tendo em vista que poderiam ocorrer mudanças na biologia do parasito, foi realizada uma comparação entre a cepa sensível e resistente, baseada em parâmetros parasitológicos e patogênicos. Foi observada uma menor recuperação de vermes na cepa resistente, com menor quantidade de ovos liberados nas fezes, indicando uma menor adaptação dessa cepa à infecção. Sugere-se que outros mecanismos, independentes do alvo de ligação da droga, estejam relacionados com resistência aos benzimidazóis em ancilostomídeos.
Abstract: Mass administration of benzimidazoles corresponds to the main method of control of hookworms, however, this strategy may select strains of parasites resistant to the drug. Single nucleotide polymorphism (SNP) at codons 167, 198 and 200 of the β-tubulin isotype 1 gene are associated with resistance to benzimidazoles in some nematodes. The mutation at codon 167 has never been described for hookworms, whereas mutations at codons 198 and 200 have already been described for these helminths, at low frequency in nature. The objective of this work was to investigate the participation of polymorphisms in the β-tubulin isotype 1 gene in the resistance process to benzimidazoles in hookworms. A screening of the canonical SNPs related to resistance in different species of hookworms was carried out. Adult worms of Ancylostoma braziliense (81) and Ancylostoma caninum (327) were collected from naturally infected dogs from two and six states of Brazil, respectively, and Necator americanus eggs (552) from faecal samples from six states of Brazil. Codons 167 and 198 of A. caninum were evaluated by ARMS-PCR and Tetraprimer ARMS-PCR, respectively (codon 200 of this species was analyzed in a previous work). All codons of A. braziliense and N. americanus were analyzed by RFLP-PCR. Mutations were observed only to the codon 198 of A. braziliense and N. americanus, with a frequency of 1.2% and 1.4%, respectively, and in the codon 200 of N. americanus, with a frequency of 1.1%. Considering the low frequency of these SNPs in nature and the possibility of other mechanisms being involved in the benzimidazole resistance, the selection of a resistant strain of Ancylostoma ceylanicum in hamsters was performed by selective drug pressure. Since the canonical SNPs in the β-tubulin gene of this strain were not observed, a β-tubulin isotype 1 cDNA mini library was constructed to the resistant worms. Sequence analyzes of the clones showed three independent SNPs not reproducible among the samples. Considering that changes in the parasite biology could occur, a comparison between the sensitive and resistant strain was made, based on parasitological and pathogenic parameters. A lower recovery of worms was observed in the resistant strain, with a lower amount of eggs released in the faeces, indicating a lower adaptation of this strain to the infection. It is suggested that other mechanisms, independent of the drug binding target, are related to resistance to benzimidazoles in hookworms.
Subject: Parasitologia
Ancilostomídeos
Benzimidazóis
Tubulina
Polimorfismo genético
language: por
metadata.dc.publisher.country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials: UFMG
metadata.dc.publisher.department: ICB - INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLOGICAS
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-Graduação em Parasitologia
Rights: Acesso Aberto
metadata.dc.rights.uri: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/
URI: http://hdl.handle.net/1843/34825
Issue Date: 16-Mar-2018
Appears in Collections:Teses de Doutorado

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
TESE- LUIS FERNANDO VIANA FURTADO.pdf9.17 MBAdobe PDFView/Open


This item is licensed under a Creative Commons License Creative Commons