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http://hdl.handle.net/1843/35475| Type: | Tese |
| Title: | Caracterização de mecanismos citotóxicos induzidos pelo veneno de Bothrops atrox e de sua toxina purificada L-aminoácido oxidase |
| Authors: | Fernanda Costal Oliveira |
| First Advisor: | Carlos Delfin Chavez Olórtegui |
| First Co-advisor: | Vânia Braga |
| First Referee: | Márcia Helena Borges |
| Second Referee: | Mariana Quezado |
| Third Referee: | Vanessa Pinho da Silva |
| metadata.dc.contributor.referee4: | Andreimar Martins Soares |
| Abstract: | As serpentes do gênero Bothrops são responsáveis por 90% dos casos de envenenamento no Brasil. O veneno botrópico é uma mistura de moléculas rica em peptídeos e proteínas. Um importante componente desse veneno são as L- aminoácido oxidases (LAAOs), enzimas que exibem múltiplas atividades farmacológicas como hemorragia, edema e citotoxicidade e, consequentemente, contribuem para o desenvolvimento do quadro clínico do envenenamento. A caracterização de venenos animais e de seus componentes isolados, auxiliam a elucidar o mecanismo de ação envolvido e abre possibilidades para avanços no tratamento utilizado. Além disso, venenos de serpentes constituem uma rica fonte de moléculas com potencial biotecnológico que precisam ser explorados. Neste trabalho foram avaliadas as alterações causadas pelo veneno de B. atrox e pela LAAO purificada em queratinócitos. A purificação da LAAO foi realizada por meio de três passos cromatográficos: gel filtração, troca iônica e afinidade por heparina. A LAAO obtida apresentou 62,5kDa e se mostrou mais estável quando mantida a -80 oC. O veneno e a LAAO foram capazes de diminuir a viabilidade celular de forma concentração dependente. A dose citotóxica foi definida como 5,5 g/mL para o veneno e 5,1 g/mL para LAAO. Os queratinócitos tratados com LAAO sofreram autofagia (após 1,5 hora) seguida por apoptose e necrose (após 12 e 24 horas). Em relação a morfologia, o veneno de B. atrox induziu retração das células e das extremidades das colônias, formação de aglomerados celulares, alongamento celular e desorganização da caderina e actina. As células tratadas com LAAO apresentaram diminuição da adesão ao substrato, prolongamentos anormais da actina e desorganização da caderina e dos feixes de actina. A citotoxicidade e alterações no citoesqueleto causadas por LAAO foram mediadas por H2O2, já que a adição de catalase diminuiu os efeitos tóxicos observados. O aumento de ROS detectado após a adição de LAAO nas células corrobora com o possível envolvimento de H2O2 nessas atividades. Os resultados obtidos neste trabalho contribuem para o melhor entendimento da toxicidade do veneno de B. atrox e da LAAO, auxiliando a elucidar o mecanismo de ação durante o envenenamento. |
| Abstract: | Bothrops spp. are responsible for 90% of snakebites in Brazil. Bothropic venom is a complex mixture of molecules enriched with peptides and proteins. An important component of this venom are L-amino acid oxidases (LAAOs), enzymes that exhibit multiple pharmacological activities such as hemorrhage, edema and cytotoxicity and consequently, contribute to the development of clinical envenomation symptoms. Animal venoms and isolated components characterization contributes for elucidation of the mechanism of action and opens possibilities for treatment improvement. In addition, snake venoms are a rich source of molecules with biotechnological potential which needs to be explored. The aim of this study was to evaluate changes caused by B. atrox venom and LAAO in keratinocytes. LAAO purification was performed through three chromatographic steps: molecular exclusion, ion exchange and heparin affinity. Purified LAAO presented 62.5kDa and was more stable when kept at -80 oC. B. atrox venom and LAAO were able to decrease cell viability in a concentration-dependent manner. Cytotoxic dose was defined as 5.5 g/mL for the venom and 5.1 g/mL for LAAO. LAAO-treated keratinocytes underwent autophagy (after 1.5 hours) followed by apoptosis and necrosis (after 12 and 24 hours). Regarding morphology, B. atrox venom induced cell and colony retraction, cell clusters formation, cell elongation, cadherin and actin disruption. Cells treated with LAAO showed decreased substrate adhesion, abnormal actin extensions and disruption of cadherin and actin bundles. Cytotoxicity and cytoskeleton alterations caused by LAAO were mediated by H2O2, since the addition of catalase decreased the toxic effects observed. It was detected an increase in intracellular ROS after addition of LAAO which corroborates with the possible involvement of H2O2 in these activities. Results obtained in this work contributes to a better understanding of B. atrox venom and LAAO toxicity, helping to elucidate their mechanism of action during envenoming. |
| Subject: | L-aminoácido oxidase Venenos de serpentes Citotoxicidade imunológica |
| language: | por |
| metadata.dc.publisher.country: | Brasil |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| metadata.dc.publisher.department: | ICB - DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E IMUNOLOGIA |
| metadata.dc.publisher.program: | Programa de Pós-Graduação em Bioquímica e Imunologia |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/35475 |
| Issue Date: | 9-Feb-2017 |
| Appears in Collections: | Teses de Doutorado |
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