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http://hdl.handle.net/1843/35644| Type: | Dissertação |
| Title: | Vias de sinalização ativadas pelo novo agonista do receptor MAS, CGEN-856S, em cardiomiócitos |
| Authors: | Eduardo Nocchi |
| First Advisor: | Silvia Carolina Guatimosim Fonseca |
| First Co-advisor: | Robson Ausgusto dos Santos |
| Abstract: | Conhecendo o efeito cardioprotetor do eixo angiotensina-(1-7) / Mas, novos agonistas do receptor Mas foram descritos. Shemesh et al. (2008) descreveram dois possíveis agonistas do receptor Mas: o CGEN-856S e CGEN-857V. O efeito cardioprotetor in vivo destes peptídeos foi confirmado por Savergnini et al. (2010). O objetivo deste trabalho foi investigar efeitos dos peptídeos CGEN-856S e CGEN857V na produção e modulação da via do óxido nítrico (NO) em cardiomiócitos e compará-los com os promovidos pela Ang-(1-7). Neste trabalho utilizou-se uma combinação de biologia molecular, microscopia confocal e um modelo de camundongo geneticamente modificado com deleção do receptor Mas (Mas-/-). Foi avaliada a produção de NO com sonda fluorescente e a localização e expressão de proteínas através das técnicas de western blot e imunofluorescência. Também foi avaliado o efeito do tratamento agudo e os efeitos de cardioprotetores do tratamento crônico com os peptídeos. RESULTADOS: Os cardiomiócitos tratados com CGEN-856S apresentaram aumento significativo na produção de NO, não havendo diferenças entre as concentrações utilizadas. O tratamento com CGEN-857V não induziu o aumento da produção de NO. O mesmo aconteceu com cardiomiócitos provenientes de camundongos Mas-/- quando tratados com CGEN-856S. Utilizando a técnica de western blot, foi possível observar aumento significativo da fosforilação da AKT no resíduo Serina 473 após o tratamento agudo com CGEN-856S. Paralelamente, cardiomiócitos neonatais tratados com Ang II por 36 horas apresentaram um aumento significativo da área celular, aumento na translocação para o núcleo de GRK-5 e redução na frequência de contração. Estes efeitos foram revertidos quando os cardiomiócitos foram tratados concomitantemente com Ang II e CGEN-856S. Os grupos de células onde o A779 ou o L-NAME foi adicionado ao CGEN-856S na presença de Ang II apresentaram resultados muito semelhantes àqueles encontrados no grupo tratado apenas com Ang II. CONCLUSÕES: O peptídeo CGEN-856S aumenta produção de óxido nítrico semelhante a Ang-(1-7). O mesmo não é observado no tratamento agudo com CGEN-857V. No tratamento crônico, o CGEN-856S antagoniza os efeitos promovidos pela a Ang II através da produção de NO. Os resultados permitem dizer que CGEN-856S age de forma e intensidade muito semelhante à Ang-(1-7), portanto, possui um grande potencial farmacológico. |
| Abstract: | Knowing the cardioprotective effects of angiotensin-(1-7)axis, new receptor agonists have been described. Shemesh et al. (2008) described two possible agonists of the receptor Mas: CGEN-856S and CGEN-857V. The cardioprotective effects of these peptides in vivo were confirmed by SAVERGNINI et al. (2010). The aim of this work was to investigate the effects of CGEN-856S and CGEN-857V peptides in the production and modulation of the nitric oxide pathway in cardiomyocytes and compare them with those promoted by Ang-(1-7). In this work we used a combination of molecular biology, confocal microscopy and a model of genetically modified mice with deletion of MAS receptor. The nitric oxide production was evaluated with a nitric oxide sensitive fluorescent probe. We also assessed the effect of acute treatment and the cardioprotective effects of chronic treatment with the peptides against Angiotensin II. Regardless of the concentration used, cardiomyocytes treated with CGEN-856S showed a significant increase in nitric oxide production, with no differences between the tested concentrations. On the contrary, treatment with CGEN-857V did not increase nitric oxide production. The same happened with cardiomyocytes from MAS knockout mice treated with CGEN-856S. Using western blot, we observed a significant increase in phosphorylation of AKT in the Serine 473 residue after acute treatment with CGEN-856S. We also tested the actions of CGEN-856S against Ang II induced hypertrophic effects. Neonatal cardiomyocytes treated with Ang II for 36 hours showed a significant increase in cell area, increased translocation of GRK5, and reduced the frequency of contractions. All these effects were prevented by concomitant treatment with CGEN-856S. When A779 (Mas receptor antagonist) or L-NAME (an inhibitor of nitric oxide synthases) was added to cells treated with Ang II and CGEN-856S, results similar to those found in cells incubated with Ang II alone were seen. CONCLUSIONS: In cardiac myocytes CGEN-856S peptide increases nitric oxide and is capable of preventing Ang II hypertrophic effects through the production of NO and via receptor Mas activation. These results indicate that CGEN-856S acts very similarly to Ang- (1-7) in cardiac myocytes. |
| Subject: | Farmacologia Óxido nítrico Angiotensinas |
| language: | por |
| metadata.dc.publisher.country: | Brasil |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| metadata.dc.publisher.department: | ICB - INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLOGICAS |
| metadata.dc.publisher.program: | Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas - Fisiologia e Farmacologia |
| Rights: | Acesso Aberto |
| metadata.dc.rights.uri: | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/ |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/35644 |
| Issue Date: | 24-Apr-2015 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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