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http://hdl.handle.net/1843/35691| Type: | Dissertação |
| Title: | Avaliação da ativação de apoptose e autofagia como mecanismo de citotoxicidade induzida por um nitrocomposto e uma hidrazona em células tumorais humanas |
| Authors: | Gabriele de Matos Cardoso Perdigão |
| First Advisor: | Elaine Maria de Souza Fagundes |
| First Referee: | Adriana Abalen Martins Dias |
| Second Referee: | Helen Lima Del Puerto |
| Abstract: | A busca por novos fármacos antitumorais é uma necessidade principalmente devido aos tratamentos atuais apresentarem alta toxicidade, baixa efetividade e aparecimento de resistência em alguns tipos de cânceres. No processo de descoberta de fármacos, compostos de diferentes classes químicas são avaliados em modelos preditivos para seleção dos mais ativos. Estes são submetidos a melhoramento químico e estudos da relação estrutura-atividade (REA) para obtenção dos candidatos mais promissores. Neste trabalho, realizamos uma investigação do potencial antitumoral e elucidação do mecanismo de ação de duas substâncias: uma hidrazona (E6) e um nitrocomposto (EBAC). Essas substâncias demonstraram baixa toxicidade em modelos de células normais como Vero e de sangue periférico humano (PBMC). A avaliação do mecanismo de ação foi realizada na linhagem humana leucêmica (HL60) através de cinética de tempo por microscopia de contraste de fase e liberação de LDH, sendo possível verificar que as células HL60 apresentavam aspectos compatíveis com apoptose após tratamento com as duas substâncias. Fragmentação de DNA foi confirmada após 24 horas de tratamento por citometria de fluxo com marcação com PI, análise em gel de agarose e por observação dos núcleos após marcação com Hoescht 33342. Ensaios com inibidor de caspases Z-VAD-FMK, Anexina V e PI, quantificação de espécies reativas de oxigênio, ativação de caspase-3 confirmaram morte por apoptose induzida pelas duas substâncias.Perda do potencial de membrana mitocondrial e detecção de caspase -9 sugerem apoptose por meio de ativação da via mitocondrial nessa linhagem leucêmica. Diferenças no mecanismo de morte foram observadas para a EBAC que induziu acúmulo de vacúolos autofágicos após análise com alaranjado de acridina e aumento da quantidade de células viáveis após utilização do inibidor de autofagia Bafilomicina A1. Estes resultados são sugestivos de que EBAC induziu autofagia e apoptose simultaneamente, o que não foi observado para E6. Os resultados em conjunto demonstram que as substâncias EBAC e E6 são substâncias promissoras com potencial antitumoral e se justifica a continuidade de estudos de relação estrutura-atividade para obtenção de derivados mais ativos. |
| Abstract: | The search for new antitumor drugs is a necessity mainly due to current treatments present high toxicity, low effectiveness and emergence of resistance in some types of cancers. In the process of drug discovery, compounds of different chemical classes are assessed in models predictive and selected for chemical optimization and studies of structure-activity relationship (SAR) to obtain the most promising candidates. We carried out an investigation of mechanism of action and the antitumor potential of two substances: a hydrazone (E6) and nitrocomposto (EBAC). These substances showed low toxicity for normal cells such as human peripheral blood mononuclear cell (PBMC). The evaluation of the mechanism of action was performed on leukemic cell line (HL60) by phase contrast microscopy and LDH release, being able to verify that HL60 cells had features consistent with apoptosis after EBAC and E6 treatment. DNA fragmentation was confirmed after 24 hours of treatment by cell cycle, DNA electrophoresis and fluorescence microscopy after Hoechst 33342-staining. The use of pan-caspase inhibitor (Z-VAD-FMK), Annexin V and PI, quantification of reactive oxygen species and caspase-3 activation confirmed apoptosis. Loss of the mitochondrial membrane potential and caspase -9 detection suggest mitochondrial pathway activation in this cell line. Differences in the mechanism of death were observed for EBAC that induced accumulation of autophagic vacuoles analysis after acridine orange and increasing the amount of viable cells after use of the autophagy inhibitor bafilomycin A1. These results suggest that EBAC induced autophagy and apoptosis simultaneously, which was not observed for E6. The results together show that EBAC and E6 are promising substances with anti-tumor potential and justify the continuation of studies of structure-activity relationship for obtaining more active derivatives. |
| Subject: | Farmacologia Apoptose Fármacos Nitrocompostos |
| language: | por |
| metadata.dc.publisher.country: | Brasil |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| metadata.dc.publisher.department: | ICB - INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLOGICAS |
| metadata.dc.publisher.program: | Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas - Fisiologia e Farmacologia |
| Rights: | Acesso Aberto |
| metadata.dc.rights.uri: | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/ |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/35691 |
| Issue Date: | 23-Sep-2016 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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