Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/1843/41895
Type: Tese
Title: Campomanesia lineatifolia Ruiz & Pav.: caracterização fitoquímica, estudos mecanísticos da atividade gastroprotetora e avaliação da atividade anti-Helicobacter pylori
Other Titles: Campomanesia lineatifolia Ruiz & Pav.: phytochemical characterization, mechanistic studies of gastroprotective activity and evaluation of anti-Helicobacter pylori activity
Authors: Nívea Cristina Vieira Neves
First Advisor: Rachel Oliveira Castilho
First Co-advisor: Marcelo Vidigal Caliari
First Referee: Gustavo Henrique Bianco de Souza
Second Referee: Patrícia Dias Fernandes
Third Referee: Fábio de Sousa Menezes Boylan
metadata.dc.contributor.referee4: Renes de Resende Machado
Abstract: Campomanesia lineatifolia Ruiz & Pav. (Myrtaceae) é uma espécie nativa comestível encontrada na Floresta Amazônica, comumente conhecida como gabiroba. No Brasil, espécies de Campomanesia são frequentemente usadas na medicina tradicional para desordens gastrintestinais. Estudos anteriores de nosso grupo de pesquisa demonstraram elevado teor de fenóis e alta atividade antioxidante para o extrato etanólico das folhas de C. lineatifolia, sugerindo relação de sua utilização etnofarmacológica como antidiarreico, antiúlcera gástrica e cicatrizante. O objetivo deste trabalho foi avaliar a fitoquímica, a atividade gastroprotetora, anti-inflamatória e anti-Helicobacter pylori de C. lineatifolia e contribuir para sua padronização químico-biológica. Para isso, foi desenvolvido método extrativo otimizado para obtenção de extrato enriquecido em fenólicos e método analítico por cromatografia líquida de ultra eficiência para avaliação qualitativa e quantitativa desse extrato. Na sequência, utilizou-se a cromatografia em contracorrente de alta velocidade e métodos espectroscópicos para isolar e caracterizar as substâncias químicas presentes no extrato otimizado. Análise por cromatografia gasosa-espectro de massas foi utilizada para identificação das substâncias químicas presentes no óleo essencial. Para avaliação das atividades gastroprotetora, anti-inflamatória e anti-H. pylori, foram realizados ensaios in vivo em modelos experimentais de úlcera gástrica e ensaios in vitro. Os resultados do planejamento extrativo permitiram selecionar o extrato etanólico obtido por sistema de refluxo como aquele enriquecido em fenólicos. Análises obtidas por cromatografia líquida-espectro de massas e ressonância magnética nuclear em 13C e 1H permitiram identificar 15 substâncias químicas no extrato etanólico otimizado, das quais 12 delas são inéditas para a espécie, sendo os flavonoides quercitrina e miricitrina as substâncias majoritárias, e a quercitrina selecionada como marcador para o desenvolvimento do método analítico. Já no óleo essencial, foram identificadas 8 substâncias químicas, representando um total de 98,09%, sendo o 3-hexen-1-ol (46,15%) e o α-cadinol (20,35%) os constituintes majoritários. Ensaio in vivo em modelo de úlcera gástrica induzida por etanol demonstrou que o extrato protegeu o estômago de camundongos, nas doses de 100 e 250 mg/Kg, e promoveu um aumento do muco gástrico. No modelo de úlcera gástrica induzida por indometacina, os animais tratados com o extrato apresentaram redução das citocinas inflamatórias CXCL-1 e IL-6, além da inibição da via do NF-κB no tecido gástrico. Ensaios in vitro em células THP-1 estimuladas por LPS mostraram que o extrato e substâncias isoladas, quercitrina e miricitrina, foram capazes de reduzir TNF-α e NF-κB. Ensaios in vitro de atividade anti-H. pylori demonstraram que o extrato etanólico foi capaz de inibir o crescimento bacteriano de cepas comerciais (MIC 0,49 μg/mL) e clínicas (MIC 125-250 μg/mL). Ainda, o óleo essencial também apresentou atividade anti-H. pylori, na menor concentração testada (MIC 0,6%) em cepas comerciais e isolados clínicos. Como conclusão, o extrato de C. lineatifolia foi otimizado e padronizado quimicamente e os ensaios in vitro e in vivo, sugerem uma relação mecanística da gastroproteção à atividade anti-inflamatória e estimuladora de muco protetor mucosal, além da atividade antibacteriana anti-H. pylori. Isto abre perspectivas para um fitoterápico como nova opção terapêutica para pacientes com úlcera gástrica, tendo em vista que os protocolos atuais de manejo clínico não contam com fármacos que apresentem estas atividades farmacológicas em associação.
Abstract: Campomanesia lineatifolia Ruiz and Pav. (Myrtaceae) is an edible native species found in the Amazon Rainforest, popularly known as gabiroba. In Brazil, Campomanesia species are traditionally used for medicinal purposes such as gastrointestinal disorders. Previous studies conducted by our research group demonstrated high phenolic content and high antioxidant activity for C. lineatifolia ethanolic extract, suggesting a relation with its ethnopharmacological use as antidiarrheal, gastric ulcer and healing. The objective of this study was to evaluate the phytochemistry, gastroprotective, anti-inflamatory, and anti-Helicobacter pylori activities of C. lineatifolia, and to contribute to its chemical-biological standardization. For this, an optimized extractive method was developed to obtain a phenolic-enriched extract, and an analytical method by ultra-performance liquid chromatography for qualitative and quantitative evaluation. Next, high-speed countercurrent chromatography and spectroscopic methods were respectively used to isolate and characterize chemical compounds in optimized extract. Gas chromatography-mass spectrometry analysis was used to identify the chemicals present in the essential oil. To evaluate the gastroprotective, anti-inflammatory and anti-H. pylori activities, in vivo assays were performed in experimental gastric ulcer models, and in vitro assays. Results of the extractive planning allowed selecting the ethanolic extract obtained by reflux system as the one enriched in phenolics. Analyzes obtained by liquid chromatography-mass spectrum and nuclear magnetic resonance in 13C and 1H allowed the identification of 15 chemical compounds in the optimized ethanolic extract, of which 12 were new for the species, with the flavonoids quercitrin and myricitrin being the major substances, thus being quercitrin selected as a marker for the development of the analytical method. In the essential oil analysis, 8 chemicals were identified, representing a total of 98.09%, with 3-hexen-1-ol (46.15%) and α-cadinol (20.35%) being the major constituents. In vivo assay in ethanol-induced ulcer model demonstrated that the extract protected the stomach of mice, at doses of 100 and 250 mg/Kg, and promoted an increase in gastric mucus. In indomethacin-induced ulcer model, mice treated with the extract showed a reduction of the inflammatory cytokines CXCL-1 and IL-6, and inhibition of the NF-κB pathway in gastric tissue. In vitro assays in LPS-stimulated THP-1 cells showed that the extract and isolated compounds, quercitrin and myricitrin, were able to reduce TNF-α and NF-κB. In vitro anti-H. pylori activity assays showed that the ethanolic extract was able to inhibit bacterial growth of commercial (0.49 μg/mL) and clinical (125-250 μg/mL) strains. Furthermore, the essential oil also showed anti-H. pylori activity at the lowest concentration tested (0.6%) in commercial and clinical isolated strains. In conclusion, the C. lineatifolia extract was chemically optimized and standardized, and the in vitro and in vivo assays suggest a mechanistic relationship between gastroprotection and anti-inflammatory activity, and mucosal protective mucus stimulator, in addition to anti-H. pylori activity. This opens perspectives for an herbal medicine as new therapeutic option for patients with gastric ulcers, considering that current clinical management protocols do not include drugs that have these pharmacological activities in association.
language: por
metadata.dc.publisher.country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials: UFMG
metadata.dc.publisher.department: FARMACIA - FACULDADE DE FARMACIA
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas
Rights: Acesso Aberto
URI: http://hdl.handle.net/1843/41895
Issue Date: 13-Sep-2021
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