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Type: Dissertação
Title: Efeitos in vitro da Kisspeptina (KP-10) na diferenciação e expressão de marcadores osteogênicos de células tronco mesenquimais da medula óssea de ratas adultas
Authors: Laís Bitencourt Guimarães
First Advisor: Amanda Maria Sena Reis
First Co-advisor: Rogéria Serakides
metadata.dc.contributor.advisor-co2: Daniel Portela Dias Machado
First Referee: Natália de Melo Ocarino
Second Referee: Milene Alvarenga Rachid
Abstract: A kisspeptina é um neuropeptídeo que se liga ao receptor GPR54 exercendo diversas funções no organismo, principalmente nos sistemas nervoso e reprodutor. Porém seus efeitos e mecanismos de ação no sistema esquelético permanecem pouco compreendidos. Este estudo avaliou o efeito de diferentes concentrações de kisspeptina (Kp-10) in vitro sobre a diferenciação osteogênica de células tronco mesenquimais (CTMs) extraídas da medula óssea (MO) de ratas Wistar adultas. Ratas de 2 meses de idade foram eutanasiadas para extração da MO de ossos longos para obtenção das CTMs. In vitro, foram estabelecidos 4 grupos experimentais: Controle e Kp-10 nas concentrações de 0,01μg/ml, 0,05μg/ml e 0,1μg/ml. Após a indução da diferenciação osteogênica, foram avaliadas a viabilidade celular pelo teste do MTT, atividade de fosfatase alcalina, síntese de colágeno, porcentagem de área coberta por CTMs/campo, nódulos mineralizados/campo, imunocitoquímica para o receptor GPR54 e avaliação da expressão gênica de colágeno tipo I, osteocalcina, osteopontina, sialoproteína óssea, Runx-2 e BMP-2 por RT-PCR em tempo real. Observou-se que as CTMs durante a diferenciação osteogênica apresentam receptor GPR54 através do qual Kp-10 se liga promovendo um efeito direto negativo sobre a diferenciação osteogênica. Esse efeito foi observado em todas as concentrações utilizadas (0,01; 0,05 e 0,1 μg/ml) e de forma concentração-dependente, caracterizado pela diminuição da atividade da fosfatase alcalina, da síntese de colágeno, de nódulos mineralizados e pela diminuição da expressão de transcritos gênicos para colágeno tipo I, osteocalcina, osteopontina e Runx-2. Dessa forma, concluímos que Kp-10 in vitro inibe a diferenciação osteogênica de CTMs extraídas da MO de ratas wistar adultas.
Abstract: Kisspeptin is a neuropeptide that binds to the GPR54 receptor, exerting several functions mainly in the nervous and reproductive systems of the body. However, its effects and mechanisms of action on the skeletal system remain poorly understood. This study evaluated the effect of different concentrations of kisspeptin (Kp-10) in vitro on the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs) extracted from the bone marrow (BM) of adult Wistar rats. Two-month-old female rats were euthanized to extract BM from long bones to obtain MSCs. In vitro, 4 experimental groups were established: control, and Kp-10 at concentrations of 0.01 µg/mL, 0.05 µg/mL and 0.1 µg/mL. After induction of osteogenic differentiation, cell viability was evaluated by the MTT test, alkaline phosphatase activity, collagen synthesis, percentage of area covered by MSCs/field, mineralized nodules/field, immunocytochemistry for the GPR54 receptor, and evaluation of gene expression of type I collagen, osteocalcin, osteopontin, bone sialoprotein, RUNX-2, and BMP-2 were done by real-time RT-PCR. It was observed that MSCs have a GPR54 receptor to which Kp-10 binds during osteogenic differentiation, promoting a direct negative effect on osteogenic differentiation. This effect was observed at all concentrations used (0.01, 0.05, and 0.1 µg/mL) and in a concentration-dependent manner, characterized by a decrease in the activity of alkaline phosphatase, collagen synthesis, mineralized nodules and by the decreased expression of gene transcripts for type I collagen, osteocalcin, osteopontin, and RUNX-2. We conclude that Kp-10 in vitro inhibits the osteogenic differentiation of MSCs extracted from the BM of adult Wistar rats.
Subject: Patologia
Neuropeptídeos
kisspeptinas
Células-Tronco Mesenquimais
Osteogênese
Roedores
language: por
metadata.dc.publisher.country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials: UFMG
metadata.dc.publisher.department: ICB - DEPARTAMENTO DE PATOLOGIA
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-Graduação em Patologia
Rights: Acesso Restrito
URI: http://hdl.handle.net/1843/42174
Issue Date: 24-Feb-2022
metadata.dc.description.embargo: 24-Feb-2024
Appears in Collections:Dissertações de Mestrado

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