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Type: Dissertação
Title: Caracterização de fatores de patogenicidade em amostras de Acinetobacter baumannii obtidas de um hospital universitário em Belo Horizonte, Minas Gerais
Authors: Priscila Simão Costa
First Advisor: Simone Gonçalves dos Santos
First Co-advisor: Vandack Nobre
metadata.dc.contributor.advisor-co2: Ricardo Gonçalves
First Referee: Mireille Ângela Bernardes Sousa
Second Referee: Jacques Robert Nicoli
Abstract: Nos últimos anos Acinetobacter baumannii tem se tornado um micro-organismo de grande importância clínica e epidemiológica. Isso se deve à sua usual resistência, intrínseca e adquirida, a vários antimicrobianos, além de sua habilidade de sobrevivência em diversos ambientes, por longos períodos de tempo. As habilidades de invasão, colonização e de destruição tecidual apresentada por linhagens desta espécie devem-se aos múltiplos fatores de patogenicidade encontrados neste micro-organismo durante a sua patogênese. O objetivo deste estudo foi avaliar fatores de patogenicidade presentes nesta espécie, por meio de análises fenotípicas e genotípicas. Foram incluídas 29 amostras de A. baumannii multirresistentes a antimicrobianos, obtidas de pacientes com infecções diversas, atendidos em um hospital universitário de Belo Horizonte no período de agosto de 2012 a maio de 2013, além da amostra de referência, A. baumannii ATCC 19606. A presença de genes associados à cápsula, biofilme, apoptose e quorum sensing (QS) foram pesquisados pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). Para o ensaio de apoptose, fagocitose e de espécies reativas de oxigênio (ROS), utilizou-se Kits específicos e análises por citometria de fluxo. A avaliação do estresse oxidativo foi realizada pelo método de disco difusão com peróxido de hidrogênio. O teste de hemólise foi executado em 06 tipos sanguíneos diferentes (humano, carneiro e cavalo), sendo os de origem humana de fator Rh positivo. Todas as amostras positivas para gaiU e 76% para wzc. No que se refere a quorum sensing, 10% das amostras apresentaram o gene luxI e 7% luxR. Todas as amostras foram positivas para bap, relacionado à formação de biofilme. Em relação às porinas, 14% foram positivas para omp33 e 31% para ompA. 24% das amostras apresentaram todos os genes pesquisados relacionados à patogenicidade. Nos ensaios em citometria de fluxo, exceto uma amostra, todas induziram a formação de ROS por macrófagos em diferentes taxas. Na fagocitose, todas as amostras foram fagocitadas, porém também em diferentes taxas. Na indução de apoptose em macrófagos por linhagens de A. baumannii, foram 08 amostras cuja incubação resultou em significativa redução no número de macrófagos em relação ao controle, já em relação à amostra de referência, somente duas amostras. No que concerne estresse oxidativo por peróxido de hidrogênio, 20 amostras obtiveram significância estatística (p<0,05) em relação à amostra de referência, 06 foram mais sensíveis, e 14 mais resistentes. No potencial zeta, apenas 03 amostras apresentaram valores significativamente mais eletronegativos (p<0,05) que o da ATCC. Por fim, no ensaio de produção de hemolisinas, nenhuma amostra apresentou atividade hemolítica nos 06 tipos sanguíneos avaliados. Os dados deste estudo são relevantes para a Saúde Pública, pois permitem o conhecimento da epidemiologia molecular desta espécie, bem como o de alguns fatores de patogenicidade, que têm sido pouco descritos no Brasil, permitindo assim reforçar o monitoramento e implementar medidas de controle.
Abstract: In recent years, A. baumannii has become a microorganism of great clinical and epidemiological relevant. This importance is due to its extraordinary ability to present resistance, both intrinsic and acquired, to several antimicrobials, besides its ability to survive on the environmental surfaces for long time. Moreover, the pathogenic ability of this specie including invasion, colonization and tissue destruction results from multiple virulence factors produced by this microorganism. The objective of this study was to evaluate virulence factors present in this species, through phenotypic and genotypic analyzes. Twenty-nine samples of antimicrobial multiresistant A. baumannii obtained from patients with various infections admitted to a teaching hospital in Belo Horizonte from 2012 to may 2013 were included, in addition to the reference sample, A. baumannii ATCC 19606. The presence of capsule-associated genes, biofilm, apoptosis and quorum sensing were investigated by the polymerase chain reaction (PCR) technique. For the apoptosis, phagocytosis and reactive oxygen species (ROS) assay, specific kits and flow cytometric analyzes were used. The evaluation of oxidative stress was carried out by the disc diffusion method with hydrogen peroxide. The hemolysis test was performed on 06 different blood types (human, sheep and horse), being those of human origin of factor Rh positive. All samples were positive for gaiU and 76% for wzc. Concerning quorum sensing, 10% of the samples had the luxI gene and 7% luxR. All samples were positive for bap, related to biofilm formation. Regarding OMPs, 14% were positive for omp33 and 31% for ompA. 24% of the samples presented all virulence related genes. In ROS and phagocytosis production assays in flow cytometry, except for one sample, all induced the formation of ROS by macrophages at different rates. In phagocytosis, all samples were phagocytosed, but at different rates. In the induction of apoptosis in macrophages by A. baumannii lines, there were 08 samples which incubation resulted in a significant reduction in the number of macrophages in relation to the control, but in relation to the reference sample, only two samples. In relation to oxidative stress by hydrogen peroxide, 20 samples had statistical significance (p <0.05) in relation to the reference sample, 06 were more sensitive, and 14 were more resistant. At the zeta potential, only three samples presented significantly more electronegative values (p <0.05) than the reference sample. Finally, in the hemolysin production assay, no sample had hemolytic activity in the 06 blood types evaluated. The data of this study are relevant to public health, since they allow the knowledge of the molecular epidemiology of this species, as well as some virulence factors, which have been little described in Brazil, thus allowing to reinforce the monitoring and to implement control measures.
Subject: Microbiologia
Acinetobacter baumannii/patogenicidade
Apoptose
macrófagos
Fagocitose
Espécies Reativas de Oxigênio
language: por
metadata.dc.publisher.country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials: UFMG
metadata.dc.publisher.department: ICB - DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-Graduação em Microbiologia
Rights: Acesso Aberto
URI: http://hdl.handle.net/1843/42462
Issue Date: 23-Feb-2017
Appears in Collections:Dissertações de Mestrado

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