LAMP-2 absence interferes with plasma membrane repair and decreases T. cruzi host cell invasion

Abstract

Trypanosoma cruzi entra nas células hospedeiras subvertendo o mecanismo de reparo da membrana celular. Nesse processo, o parasita induz pequenas lesões na membrana da célula hospedeira levando à entrada de cálcio e exocitose lisossomal, que são seguidas por eventos de endocitose compensatória que conduzem os parasitas para dentro das células hospedeiras. Mostramos anteriormente que a ausência de LAMP-1 e 2, componentes principais das membranas lisossômicas, diminui a invasão do T. cruzi nas células hospedeiras, mas o mecanismo pelo qual eles interferem na invasão do parasita não foi descrito. Aqui nós investigamos o papel dessas proteínas na morfologia do vacúolo parasitóforo, exocitose lisossomal da célula hospedeira e capacidade de reparo da membrana. Primeiramente, mostramos que as células que não possuem apenas LAMP-2 apresentam o mesmo fenótipo de invasão que as células LAMP1/2-/-, indicando que LAMP-2 é um importante ator durante o processo de invasão do T. cruzi. Em segundo lugar, nem a morfologia do vacúolo nem a exocitose lisossomal foram alteradas em células sem LAMP-2 (células LAMP2-/- e LAMP1/2-/-). Em seguida, investigamos a capacidade de células deficientes em LAMP-2 de realizar endocitose compensatória na secreção lisossomal, o mecanismo pelo qual as células reparam sua membrana e o T. cruzi finalmente entra nas células. Observamos que essas células realizam menos endocitose na lesão quando comparadas às células WT. Isso foi uma consequência do tráfego prejudicado de colesterol em células sem LAMP-2 e sua influência na distribuição de caveolina-1 na membrana plasmática da célula, que é crucial para o reparo da membrana plasmática. Os resultados aqui apresentados mostram o papel principal do LAMP-2 no tráfego de caveolina e reparo de membrana e consequentemente na invasão do T. cruzi.