Development and validation of rt-qpcr for vesicular stomatitis virus detection (Alagoas vesiculovirus)

Abstract

A estomatite vesicular é uma doença infecciosa que ocorre principalmente em países do Hemisfério Ocidental e afeta bovinos, suínos e equinos. Os sintomas clínicos em bovinos e suínos são semelhantes à febre aftosa e incluem ulceração vesicular da língua e da boca. A doença requer um diagnóstico diferencial rápido e preciso, visando a implementação imediata de medidas de controle. O objetivo do presente estudo foi desenvolver e realizar testes de validação de RT-qPCR(s) multiplex para detecção de RNA de vesiculovírus de Alagoas, considerando os parâmetros de sensibilidade e especificidade analítica, desempenho analítico (critérios de repetibilidade e reprodutibilidade) e a incerteza da medição. Os valores do ciclo limiar obtidos em triplicata de cada amostra foram avaliados considerando as variações entre dias, analistas e equipamentos em uma análise de variância visando determinar as variâncias de repetibilidade e reprodutibilidade. Os resultados mostraram que os RT-qPCRs apresentaram excelente sensibilidade e especificidade na detecção do RNA do vesiculovírus de Alagoas. Os parâmetros de validação apresentaram baixos coeficientes de variação e foram equivalentes aos encontrados em outros estudos de validação, indicando que os testes apresentaram excelente repetibilidade e reprodutibilidade.