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http://hdl.handle.net/1843/48477
Tipo: | Dissertação |
Título: | Padronização de um modelo murino e avaliação do papel do receptor CCR2 na doença periodontal experimental induzida por Porphyromonas gingivalis |
Título(s) alternativo(s): | Standardization of a murine model and evaluation of the role of the CCR2 receptor in experimental periodontal disease induced by Porphyromonas gingivalis |
Autor(es): | Thales Augusto Anestino |
primer Tutor: | Mila Fernandes Moreira Madeira |
primer Co-tutor: | Celso Martins Queiroz-Junior |
primer miembro del tribunal : | Caio Tavares Fagundes |
Segundo miembro del tribunal: | Paula Rocha |
Resumen: | A doença periodontal (DP) pode ser caracterizada como um processo inflamatório de etiologia infecciosa, que acomete os tecidos de suporte dos dentes. Um dos microrganismos associado à DP é Porphyromonas gingivalis, cocobacilo Gram-negativo, anaeróbio obrigatório, residente do biofilme subgengival e classificado como patógeno-chave na DP. Os mecanismos de patogenicidade de P. gingivalis promovem disbiose do biofilme subgengival, o que induz uma resposta do hospedeiro com a síntese de mediadores inflamatórios que levam à reabsorção do osso alveolar. Dentre esses mediadores, está o ligante 2 de quimiocina com motivo C-C (CCL2) que, ao interagir com o receptor do tipo 2 para quimiocina C-C (CCR2), aumenta o recrutamento de macrófagos para o sítio da infecção, que podem diferenciar-se em osteoclastos. Assim, o objetivo deste trabalho foi padronizar um modelo experimental murino de DP induzido por P. gingivalis e avaliar o papel de CCR2 neste processo. Para isso, camundongos C57Bl/6 foram submetidos a diferentes protocolos de infecção periodontal (antimicrobiano na água de beber, aplicação tópica de gel de clorexidina 0,12% ou ausência de manipulação da microbiota), sendo inoculados com 108 UFC/mL de P. gingivalis na cavidade bucal. Após eutanásia em diferentes tempos experimentais, os tecidos periodontais foram avaliados quanto à perda óssea alveolar, expressão de citocinas e quimiocinas por ELISA, determinação de neutrófilos e macrófagos, avaliação histopatológica e imuno-histoquímica para neutrófilos. Para avaliar o papel de CCR2, grupos de camundongos WT e Ccr2-/- foram inoculados e, após eutanásia em diferentes tempos pós-infecção, os tecidos periodontais e linfonodos cervicais foram avaliados. A infecção com P. gingivalis induziu perda óssea alveolar independente do protocolo adotado. Tal perda óssea associou-se ao aumento de IL-6 e número de osteoclastos e diminuição de CXCL-1, neutrófilos e NAG. Os animais Ccr2-/- infectados apresentaram maior reatividade ao estímulo bacteriano por apresentarem maior índice fagocítico in vitro e montagem de resposta na fase aguda da doença, o que gerou maior perda óssea alveolar na fase crônica, associada ao aumento na produção de IL-1b, CCL2 e diminuição de IL-10 em relação aos animais WT infectados. Conclui-se, então, que a infecção com P. gingivalis induz reabsorção óssea alveolar associada ao aumento de IL-6 e que CCR2 é importante no remodelamento ósseo associado à DP experimental. Palavras chave: Doença periodontal. Porphyromonas gingivalis. Quimiocinas. CCL2. |
Abstract: | Periodontal disease (PD) is an infectious inflammatory process that affects the teeth supporting tissues. One of the microorganisms associated with PD is Porphyromonas gingivalis, Gram-negative obligate anaerobic coccobacillus resident in the subgingival biofilm and classified as keystone-pathogen of chronic periodontitis. This bacterium promotes and maintains a dysbiosis of the dental subgingival biofilm. Thus, in response to dysbiosis, inflammatory osteoclastogenics mediators are produced, triggering the resorption of the alveolar bone. Among the inflammatory mediators produced in PD is CC chemokine ligand 2 (CCL2). When interacting with the chemokine type 2 receptor CC (CCR2), CCL2 promotes increased recruitment of macrophages to the site of infection, which may differentiate into osteoclasts. Thus, this study aims to standardize a murine model of PD induced by P. gingivalis and to evaluate the role of CCR2 in this process. To that end, mice were submitted to different protocols of periodontal infection (antimicrobial in drinking water, topical application of 0.12% chlorhexidine gel or no manipulation of the microbiota), being inoculated with 108 CFU / mL of P. gingivalis in the oral cavity. After 45 days, mice were euthanized, periodontal tissues were collected and processed for analysis of alveolar bone loss. Subsequently, infection kinetics was performed to assess the inflammatory response. Periodontal tissues were collected and processed for analysis. To evaluate the role of CCR2, groups of WT and Ccr2- / - mice were inoculated, and after 30 or 45 days the animals were euthanized, the periodontal tissues were collected and processed for further analysis. WT infected mice showed significant alveolar bone regardless adopted protocol. This alveolar bone loss is associated with an increased IL-6, osteoclasts and decreased CXCL-1, neutrophils and NAG production. Ccr 2-/- infected mice showed increased reactivity front the bacterial stimulus to showed a more phagocytic index in vitro and response assembly in acute phase to lead a greater alveolar bone loss in cronic phase, associated with an increased IL-1b, CCL2 and decreased IL-10 production when compared to WT infected mice. These results show that infection with P. gingivalis induces IL-6-associated bone resorption, as well as pointing out that CCR2 is important in bone remodeling associated with experimental PD. Keywords: Periodontal disease. Porphyromonas gingivalis. Chemokines. CCL2. |
Asunto: | Microbiologia Doenças periodontais Porphyromonas gingivalis Quimiocinas CC |
Idioma: | por |
País: | Brasil |
Editor: | Universidade Federal de Minas Gerais |
Sigla da Institución: | UFMG |
Departamento: | ICB - DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA |
Curso: | Programa de Pós-Graduação em Microbiologia |
Tipo de acceso: | Acesso Aberto |
URI: | http://hdl.handle.net/1843/48477 |
Fecha del documento: | 27-feb-2020 |
Aparece en las colecciones: | Dissertações de Mestrado |
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