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http://hdl.handle.net/1843/48577
Type: | Tese |
Title: | Determinação de promotores de crescimento em urina e soro de bovinos: validação de um método empregando QuEChERS e UHPLC-HRMS/MS e estudo in vivo |
Authors: | Mariana Cristina da Silva |
First Advisor: | Adriana Ferreira Faria |
First Referee: | Heitor Daguer |
Second Referee: | Jonas Augusto Rizzato Paschoal |
Third Referee: | Adriana Nori de Macedo |
metadata.dc.contributor.referee4: | Rodinei Augusti |
Abstract: | Este trabalho descreve o desenvolvimento e a validação de um método multirresíduos empregando QuEChERS e UHPLC-HRMS/MS, para determinação de 37 promotores de crescimento em urina e de 20 em soro de bovinos. O método cromatográfico foi otimizado visando a separação dos pares de isômeros: alfa-trembolona e beta-trembolona, metenolona e metil-testosterona, alfa-zearalenol e zearalanona, que apresentaram tempos de retenção próximos. A otimização espectrométrica objetivou obter um método que atendesse critérios quantitativos e com elevada sensibilidade, assim, utilizou-se fonte electrospray e aquisição fullscan - parallel reaction monitoring. Na otimização do procedimento de extração, foram avaliados o tipo e o volume de solvente extrator, os sais e os sorventes empregados nas etapas de partição e clean-up e a influência da adição de solução de TRIS (pH 9,5) na extração dos analitos. A condição otimizada para extração de 5 mL de urina consistiu na adição da solução de TRIS (pH 9,5) após a etapa de hidrólise enzimática, extração com 10 mL de acetonitrila, adição de 2 g de NaCl para auxiliar na partição e 3,3 g de MgSO4:PSA (2:1, m/m) para clean-up. Na validação, as recuperações obtidas variaram entre 84 - 113%, coeficiente de variação entre 2 - 32% e limite de quantificação entre 0,2 - 2,5 µg L-1. O método desenvolvido foi submetido ao ensaio de proficiência do Progetto Trieste, pelo qual se mostrou proficiente para análise dos anabolizantes avaliados e não apresentou falso positivo na análise de metiltestosterona, estanozolol e β-boldenona. As recuperações também foram satisfatórias para os seguintes analitos: β-trembolona (R=86%), zeranol (R=90%) e taleranol (R=108%). Na expansão de escopo para a matriz soro de bovino, o método apresentou performance adequada, com recuperações entre 91,1 - 114,1% e coeficiente de variação entre 0,3 - 4,0%. O estudo in vivo, com administração intramuscular de estanozolol em bovinos, mostrou que o metabólito16-hidróxi-estanozolol é o composto marcador na detecção de estanozolol na matriz urina, com uma janela de detecção de 7 a 17 dias. Na matriz soro, o próprio estanozolol é o composto de maior intensidade, com uma janela de detecção de 3 a 10 dias. Nos estudos de estabilidade, em ambas as matrizes, as amostras mostraram serem estáveis por 240 dias a -20 °C e após 5 ciclos de congelamento/descongelamento. |
Abstract: | This work presents the development and validation of a multi-residue method using QuEChERS and UHPLC-HRMS/MS, to determine 37 growth promoters in bovine urine and 20 in bovine serum. The chromatographic method has been optimized aiming for the separation of the pair of isomers: alpha-trenbolone and beta-trenbolone; methenolone and methyl-testosterone; alpha-zearalenol and zearalenone, which exhibited similar retention times. The spectrometric optimization aimed to obtain a method that reached the quantitative criteria with high sensitivity, thus, the electrospray ion source and fullscan-parallel reaction monitoring were used. As for the extraction procedure optimization, the solvent composition and volume, the types of salts and adsorbents used in the partition and clean-up stages, and the influence of the TRIS solution (pH 9.5) on the extraction of the analytes were evaluated. The optimized condition for extraction of 5 mL of urine consisted of: the addition of TRIS solution (pH 9.5) after the enzymatic hydrolysis step, 10 mL of acetonitrile to extraction, 2 g of NaCl to improve the partition, and 3 g of MgSO4: PSA (2:1, m/m) to clean-up. During validation, the obtained recoveries varied between 84 – 113%, relative standard deviation between 2 and 32%, and quantification limit between 0.2 – 2.5 µg L-1. The developed method was submitted to the Progetto Trieste proficiency test, which proved to be proficient in the analysis of the evaluated anabolic steroids since there were no false positive results in the analysis of methyltestosterone, stanozolol, and β-boldenone. The recoveries for the following analytes also exhibited excellent performance: β-trembolone (R=86%), zeranol (R=90%), and taleranol (R=108%). In the extension of scope to the bovine serum matrix, the method presented adequate performance, with recoveries between 91.1 - 114.1% and a relative standard deviation between 0.3 - 4.0%. The in vivo study, with intramuscular administration of stanozolol in bovines, showed that the metabolite 16-hydroxy-stanozolol is the marker compound in the detection of stanozolol in the urine matrix, with a detection window of 7 to 17 days. In the serum matrix, the stanozolol itself is the most intense compound, with a detection window of 3 to 10 days. In the stability studies, in both matrices, the samples were shown to be stable for 240 days at -20 °C and after 5 freeze/thaw cycles. |
Subject: | Química analítica Urina Análise Bovino Crescimento Bovino de corte Esteroides anabólicos Carne bovina Resíduos de drogas em veterinária Extração por solventes Espectrometria de massa Cromatografia líquida de alta eficiência Testes biológicos |
language: | por |
metadata.dc.publisher.country: | Brasil |
Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
Publisher Initials: | UFMG |
metadata.dc.publisher.department: | ICX - DEPARTAMENTO DE QUÍMICA |
metadata.dc.publisher.program: | Programa de Pós-Graduação em Química |
Rights: | Acesso Aberto |
URI: | http://hdl.handle.net/1843/48577 |
Issue Date: | 26-Oct-2022 |
Appears in Collections: | Teses de Doutorado |
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