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http://hdl.handle.net/1843/52656| Type: | Dissertação |
| Title: | Estudo sobre o reparo por recombinação homóloga em diferentes linhagens de Trypanosoma cruzi |
| Other Titles: | Study about the homologous recombination repair in distinct strains of Trypanosoma cruzi |
| Authors: | Bruno Marçal Repolês |
| First Advisor: | Carlos Renato Machado |
| First Referee: | Danielle Passos Silva |
| Second Referee: | Vasco Ariston de Carvalho Azevedo |
| Abstract: | O Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da doença de Chagas. A variedade de sintomas da doença de Chagas pode estar relacionada com a variabilidade genética de diferentes cepas de Trypansoma cruzi. Estudos de infecção com diferentes misturas de linhagens do parasito demonstraram diferença no tropismo entre representantes de cepas distintas, demonstrando que a variabilidade genética entre populações do parasito resulta em fenótipos distintos.Apesar das incertezas quanto à posição de determinadas populações de Trypanosoma cruzi e suas relações filogenéticas, tem-se a divisão destas populações em seis linhagens taxonômicas distintas. Mesmo que relatos da ocorrência de eventos de recombinação sejam raros na literatura, sabe-se que eles ocorreram entre essas populações, gerando uma divisão entre linhagens híbridas e não-híbridas deste parasito.O metabolismo de DNA de Trypanosoma cruzi é foco de estudo de nosso grupo. Uma das vias de reparo de DNA é a via de reparo por recombinação homóloga. Esta via é responsável por lidar com quebras nas fitas dupla de DNA, geradas por agentes externos ou pelo metabolismo dos organismos.Tendo em vista este fato, estudamos a resposta à radiação ionizante (um causador de quebras de fitas dupla) em diferentes cepas representantes de linhagens distintas de Trypanosoma cruzi. Após a exposição à 500Gy de radiação ionizante,foi observado que linhagens não-híbridas apresentam um fenótipo distinto de linhagens híbridas com relação a resposta a estes danos. As linhagens não híbridas possuem uma retomada de crescimento mais rápida quando comparadas com a linhagem híbrida Cl Brener. A análise dos genes envolvidos no reparo mostrou diferenças na sequência de certas proteínas entre as cepas, e a predição do impacto destas modificações, a partir da análise de interação pelo software HADDOCK,demonstrou que a interação entre as proteínas de cada cepa pode ser distinta. A partir de PCR em tempo real, foi visto que os níveis basais de transcritos para as proteínas BRCA2 e Rad51, essenciais ao processo, são diferentes entre as cepas podendo. Demonstramos também, que a sinalização para o reparo das quebras de fita dupla é rápida e importante para o processo, já que a inibição utilizando cafeína destas vias de sinalização é capaz de atrasar a retomada de crescimento após a irradiação. Pudemos concluir que a resposta à radiação ionizante é diferente entre cada uma das cepas estudadas, assim como parece que linhagens híbridas respondem melhor à estas quebras, que pode estar relacionada com níveis distintos das proteínas Rad51 e BRCA2 entre as cepas. Concluímos também que a sinalização é importante e rápida após a exposição à radiação ionizante e igual para toda as cepas estudadas. |
| Abstract: | cruzi and their phylogenetic relationships, phylogeny studies recently subdivided T. cruzi into six discrete taxonomic units, named T. cruzi I to T. cruzi VI. Even though reports the occurrence of recombination events are rare in the literature, it is known that they occur between populations, creating a division between hybrid and non-hybrid populations of the parasite.The Trypanosoma cruzi DNA metabolism is focus of study of our group. Repair by homologous recombination is one of the major DNA repair pathways. This pathway is responsible for dealing with breaks in the double strands of DNA, generated by external agents or the metabolism of organisms. While other organisms have other pathways, such as non-homologous end joining to deal with double strand breaks, Trypanosoma cruzi relies only on repair by homologous recombination to deal with this kind of damage, since major proteins on the non-homologous endoining pathway could not be identified. In view ofthis fact, we studied the responseto ionizing radiation, an agent capable of causing double strand breaks, in different strains of Trypanosoma cruzi. Although the parasite does not face high doses of radiation on his life cycle, it can resist to doses as high as 500Gy of ionizing radiation. It was observed, after the exposure to ionizing radiation, that non-hybrid lineages havea distinctphenotype fromhybrid linesin response tothis kind of damage. The analysis ofgenes involvedin the repairrevealeddifferences in thesequenceof certain proteinsbetweenstrains, andthe predictionof the impactof thesechanges made on HADDOCK software,showed that the interactionbetween the proteinsofeach straincould bedifferent. Also,the basal levels oftranscripts of the proteins BRCA2 and Rad51, essentialto the process,are differentbetween thestrainscouldmean the differenceinobservedphenotype.We also demonstratethat cell signalingis quick andimportant tothe repair process, since the inhibitionofsignaling pathwaysisable to delaythe resumptionofgrowthafter irradiation |
| Subject: | Genética Trypanosoma cruzi Reparo do DNA Recombinação homóloga Radiação Ionizante Quebras de DNA de cadeia dupla |
| language: | por |
| metadata.dc.publisher.country: | Brasil |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| metadata.dc.publisher.department: | ICB - DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA GERAL |
| metadata.dc.publisher.program: | Programa de Pós-Graduação em Genética |
| Rights: | Acesso Aberto |
| metadata.dc.rights.uri: | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/ |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/52656 |
| Issue Date: | 7-Aug-2015 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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