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http://hdl.handle.net/1843/52802
Full metadata record
DC Field | Value | Language |
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dc.contributor.advisor1 | Frederico Marianetti Soriani | pt_BR |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/3671650166497515 | pt_BR |
dc.contributor.referee1 | Leonardo Nimrichter | pt_BR |
dc.contributor.referee2 | Iran Malavazi | pt_BR |
dc.contributor.referee3 | Vasco Ariston de Carvalho Azevedo | pt_BR |
dc.contributor.referee4 | Nalu Teixeira de Aguiar Peres | pt_BR |
dc.creator | Jéssica Amanda Marques Souza | pt_BR |
dc.creator.Lattes | http://lattes.cnpq.br/7505513464818733 | pt_BR |
dc.date.accessioned | 2023-05-04T15:02:12Z | - |
dc.date.available | 2023-05-04T15:02:12Z | - |
dc.date.issued | 2019-07-31 | - |
dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/1843/52802 | - |
dc.description.abstract | The release of biomolecules by cells of different organisms have been associated with the secretion of extracellular vesicles, an evolutionarily conserved mechanism considered a potent vehicle of intercellular communication. Recent studies demonstrated that EV liberation from many microorganisms, including pathogenic fungi, is associated with the physiology and pathogenicity of these microorganisms. In this work we isolated, for the first time, EVs produced by A. fumigatus, an ubiquitous and saprophytic organism, considered an important pathogen in immunocompromised patients. The first structural EVs characterizations from A. fumigatus demonstrated a production of circular bilayer structures, a characteristic of EVs, with 100 to 200 nm diameter. A. fumigatus EVs have ergosterol and a protein burden very diverse, containing proteins related to the remodeling of cell wall and metabolism, and proteins involved in virulence like REDOX proteins and allergens. We demonstrated that phagocytes are able to internalize A. fumigatus EVs, and the sensitization of phagocytic cells (macrophages and bone-marrow derived neutrophils – BMDN) with EVs, before fungus challenging, resulted in an increasing of phagocytic capacity culminating in a higher clearance of the fungal pathogen. It was also demonstrated that EVs of this fungus are able to induce production of TNF-α and CCL2 by macrophages and an additive effect was observed in production of these mediators when the cells were challenged with conidia. In EVs sensitized BMDN, there was an increase in TNF-α and IL-1β production after conidia exposure. Moreover, in an animal immunization model with EVs from A. fumigatus, there was a reduction in inflammatory infiltrate to alveoli of animals after intranasal infection with A. fumigatus conidia. The immunization also conferred a reduction in production of the pro-inflammatory mediators IL-β, IL-6 and CXCL1, and a slight increase of IL-17 after infection. The decrease of IL-1β in immunized animals was corroborated by a lower activation of inflammasome, characterized by a lower activation of caspase-1. We also evaluated the participation of proteins from ESCRT complex in A. fumigatus EVs biogenesis. We observed a positive regulation of protein expression in all ESCRT complexes during the A. fumigatus growth for up to 48 hours, suggesting the participation of those complexes in EVs secretion in this fungus. Taken together, we demonstrated that A. fumigatus produces biologically active EVs that are able to impact in immune and inflammatory response, both in vitro and in vivo, increasing the fungal clearance and decreasing the inflammatory response. In this sense, A. fumigatus EVs may represent a new target for the formulation of prophylactic methods against aspergillosis. | pt_BR |
dc.description.resumo | A liberação de biomoléculas pelas células de diferentes organismos tem sido associada à secreção de vesículas extracelulares (VEs), um mecanismo evolutivamente conservado e considerado um veículo de comunicação intercelular. Estudos recentes demonstraram que a liberação de VEs por vários microrganismos, incluindo fungos patogênicos, está associada a fisiologia e patogenicidade destes microrganismos. Neste trabalho, nós isolamos, pela primeira vez, VEs produzidas por Aspergillus fumigatus, um organismo ubíquo e saprofítico e considerado um importante agente patogênico. As primeiras caracterizações estruturais das VEs de A. fumigatus demonstraram uma produção de estruturas circulares delimitadas por uma bicamada lipídica, características de VEs, que apresentam predominantemente 100 a 200 nm de diâmetro. As VEs de A. fumigatus possuem ergosterol e uma carga proteica bastante diversa, com proteínas relacionadas ao remodelamento da parede celular e metabolismo, além de proteínas envolvidas na virulência como, resistência ao estresse oxidativo e alérgenos. Demonstramos que fagócitos são capazes de internalizar VEs de A. fumigatus e a sensibilização prévia de macrófagos e neutrófilos derivados da medula óssea (BMDN) com VEs, antes do desafio com o fungo, resultou em um aumento da capacidade fagocítica culminando em uma maior depuração do patógeno fúngico. Foi demonstrado também que as VEs deste fungo são capazes de induzir a produção de TNF-α e CCL2 por macrófagos e um efeito aditivo foi observado na produção destes mediadores quando as células foram desafiadas com conídios do fungo. Em BMDN, sensibilizados com VEs, foi observado um aumento na produção de TNF-α e IL-1β, frente a exposição aos conídios. Adicionalmente, em modelo animal de imunização com VEs de A. fumigatus, foi observado uma redução do infiltrado inflamatório para os alvéolos dos animais, após infecção intranasal com conídios de A. fumigatus. A imunização também conferiu uma redução na produção dos mediadores pró-inflamatórios IL-1β, IL-6 e CXCL1 e um aumento de IL-17, após infecção. A diminuição da produção de IL-1β, em animais imunizados, foi corroborada com uma menor ativação do inflamassoma, caracterizada por uma menor ativação de caspase-1. Por fim, nós avaliamos a participação das proteínas do complexo ESCRT na biogênese das VEs de A. fumigatus. Nós observamos uma regulação positiva de proteínas de todos os complexos proteicos pertencentes a via ESCRT durante o crescimento de A. fumigatus, sugerindo a participação destes complexos na secreção de VEs neste fungo. Em conjunto, demonstramos que A. fumigatus produz VEs biologicamente ativas capazes de impactar na resposta imune e inflamatória, tanto in vitro quanto in vivo, aumentando a depuração fúngica e diminuindo a resposta inflamatória. Neste sentido, VEs de A.fumigatus podem representar um novo alvo na formulação de métodos profiláticos contra aspergilose. | pt_BR |
dc.description.sponsorship | FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais | pt_BR |
dc.description.sponsorship | CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior | pt_BR |
dc.language | por | pt_BR |
dc.publisher | Universidade Federal de Minas Gerais | pt_BR |
dc.publisher.country | Brasil | pt_BR |
dc.publisher.department | ICB - INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLOGICAS | pt_BR |
dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Genética | pt_BR |
dc.publisher.initials | UFMG | pt_BR |
dc.rights | Acesso Aberto | pt_BR |
dc.subject | Vesículas extracelulares | pt_BR |
dc.subject | fungos filamentosos | pt_BR |
dc.subject | Aspergillus fumigatus | pt_BR |
dc.subject.other | Genética | pt_BR |
dc.subject.other | Aspergillus fumigatus | pt_BR |
dc.subject.other | Fungos | pt_BR |
dc.subject.other | Vesículas extracelulares | pt_BR |
dc.title | Aspergillus fumigatus produz vesículas extracelulares biologicamente ativas capazes de estimular a resposta imune in vitro e in vivo. Caracterização estrutural e funcional | pt_BR |
dc.type | Tese | pt_BR |
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