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http://hdl.handle.net/1843/59720
Type: | Dissertação |
Title: | Efeitos da modulação mecânica induzida pela depleção do colesterol de membrana nos mecanismos de reparo celular |
Authors: | Natália Fernanda do Couto |
First Advisor: | Luciana de Oliveira Andrade |
First Referee: | Kenneth J. Gollob |
Second Referee: | Thiago Castro Gomes |
Abstract: | O reparo de membrana após injúria é um importante processo de manutenção celular especialmente para aquelas células que estão sob constante estresse mecânico, como a célula endotelial. No entanto, alterações nas propriedades biomecânicas destas células, como as decorrentes da depleção de colesterol, poderiam comprometer a capacidade de reparo de membrana destas células e, dessa forma, contribuir para a fragilidade endotelial. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi estudar a influência da modulação mecânica induzida pela depleção de colesterol da membrana plasmática, mediada pelo tratamento com MCD, no reparo de membrana plasmática. Para isto, foi utilizada uma linhagem de células endoteliais de cordão umbilical humano (EAhY926). Como em dados anteriores do grupo, nossos resultados mostraram que há uma reorganização e polimerização “de novo” das fibras de actina, com consequente aumento da rigidez celular, o qual é acompanhado de um pico de exocitose lisossomal logo nos 10 minutos iniciais de tratamento com a droga. Adicionalmente, foi mostrado que durante a depleção de colesterol, as células apresentaram um aumento de eventos endocíticos entre 10 e 20 minutos, o que coincide com o pico de exocitose observado, indicando que estes são provavelmente eventos de endocitose compensatória, decorrentes da exocitose lisossomal. Paralelamente, foi observado que a endocitose constitutiva, proveniente de processos de pinocitose, comuns em células endoteliais, é bloqueado com o aumento do tempo de exposição à droga. Estes dados sugerem que o citoesqueleto reorganizado funcione como uma barreira mecânica para novos eventos de endocitose constitutiva. Ainda, células tratadas com MCD apresentaram um maior nível de injúria, coincidente ao pico de aumento de rigidez celular, em relação às células controle. Estes dados em conjunto mostram que alterações na mecânica celular, induzidas por tratamento com MCD, não só interferem com eventos de tráfego de membrana como tornam as células mais propensas a sofrerem uma injúria mecânica. |
Abstract: | Membrane repair after injury is an important process in retaining cell integrity, especially for cells which are under constant physical stress, such as endothelial cells. However, changes in the mechanical properties of membranes, such as those observed after cholesterol depletion, could impair the ability of cells in repairing injured membrane, and so contribute to endothelial fragility. The goal of this work was to evaluate the influence of the mechanical modulation induced by cholesterol depletion, upon MCD treatment, on membrane repair mechanisms. All the experiments were performed using a cell lineage of a human umbilical vein endothelial cell (EAhY926). As previously observed by our group, the absence of cholesterol leads to a reorganization of cellular actin and de novo polymerization, an increase in cell rigidity, as well as an induction of a rapid event of lysosomal exocytosis as early as 10 minutes after MCD exposure. Additionally, during cholesterol sequestration, we observed an increase in endocytic events between 10-20 minutes which coincided with the peak of exocytosis, indicating that these are most likely compensatory endocytic events triggered by lysosomal exocytosis. In parallel, we observed that constitutive endocytic events, arising from pinocytic processes which are common in these cells, is blocked upon cell treatment with MCD, suggesting that the reorganized cytoskeleton could function as a mechanical barrier to pinocytic events. Also, coinciding with the peak of cell rigidity induced by MCD treatment, cells become more prone to mechanical membrane injury in relation to non-treated cells. Together, these data show that mechanical modulation induced by cholesterol depletion not only alters membrane traffic in cells, but also makes cells more susceptible to mechanical injury. |
Subject: | Colesterol Reparo de membrana Célula endotelial |
language: | por |
metadata.dc.publisher.country: | Brasil |
Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
Publisher Initials: | UFMG |
metadata.dc.publisher.department: | ICB - DEPARTAMENTO DE MORFOLOGIA |
metadata.dc.publisher.program: | Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular |
Rights: | Acesso Aberto |
metadata.dc.rights.uri: | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/ |
URI: | http://hdl.handle.net/1843/59720 |
Issue Date: | 19-Apr-2016 |
Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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