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http://hdl.handle.net/1843/60705
Tipo: | Dissertação |
Título: | Desenvolvimento de Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) para determinação plasmática de tirosina quinase tipo 1 solúvel semelhante à FMS (sFlt-1) em gestantes com alto risco para desenvolver pré-eclâmpsia. |
Autor(es): | Mara Quintela Maia |
Primeiro Orientador: | Patrícia Nessralla Alpoim |
Primeiro Coorientador: | Lara Carvalho Godoi |
Primeiro membro da banca : | Mário Dias Correa Junior |
Segundo membro da banca: | Anna Raquel Ribeiro dos Santos |
Resumo: | A pré-eclâmpsia (PE) é um distúrbio da gravidez que ocorre, normalmente, após 20 semanas de gestação, afetando de 2 a 8% das gestações globalmente e provocando alta morbi-mortalidade materna e perinatal. A patogênese da PE ainda não foi completamente elucidada, mas sabe-se que envolve fatores maternos, genéticos e imunológicos, caracterizando-se por graus variáveis de má perfusão placentária, que leva à hipertensão e lesão de múltiplos órgãos. O padrão ouro atual para o diagnóstico da doença baseia-se na análise de hipertensão com ou sem proteinúria de início recente durante a segunda metade da gestação, o que representa baixa capacidade preditiva. Nesse contexto, uma vez que, nessa doença, há um desequilíbrio entre fatores angiogênicos, como o fator de crescimento placentário (PlGF), e antiangiogênicos, como a tirosina quinase-1 solúvel semelhante à fms (sFlt-1), diretrizes internacionais sugerem o uso da razão sFlt-1/PlGF para auxiliar no diagnóstico da PE, a qual mostra melhor capacidade preditiva. Atualmente, todos os produtos aprovados pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) para determinar sFlt-1 e PlGF são importados, o que caracteriza dependência de tecnologia externa, onerando os custos em saúde. Nesse contexto, foi proposto o desenvolvimento de um ELISA para determinação dos níveis plasmáticos de sFlt-1 em gestantes com alto risco para desenvolver PE. Os seguintes parâmetros foram definidos: concentração de 2μg/mL para anticorpo de captura, concentração de 500ng/mL para anticorpo ligado à biotina, diluição de 1:200 para estreptavidina ligada à peroxidase, utilização de amostra sem diluir, obtenção de amostra a partir de coleta em tubo de soro ou plasma colhido em EDTA, heparina ou citrato; temperatura de incubação de 37ºC para amostra, anticorpo ligado à biotina e estreptavidina ligada à peroxidase; tempo de incubação de 45 minutos para amostra e anticorpo ligado à biotina, três ciclos de repetição na etapa de lavagem, estabilidade da fase sólida e do anticorpo ligado à biotina de 1,09 anos a 5ºC. Foram definidas também as formulações para as soluções de sensibilização, bloqueio, lavagem, parada e diluente de anticorpo ligado à biotina e estreptavidina ligada à peroxidase. Após a definição desses parâmetros, o conjunto diagnóstico desenvolvido demonstrou estar adequado para determinar a concentração plasmática de sFlt-1 em gestantes que desenvolveram PE. |
Abstract: | Pre-eclampsia (PE) is a pregnancy disorder characterized by hypertension that occurs after 20 weeks of gestation, affecting 2 to 8% of pregnancies worldwide and leading to high maternal and perinatal morbidity and mortality. The pathogenesis of PE has not been fully elucidated, but it is known to involve maternal, genetic, and immunological factors, characterized by varying degrees of poor placental perfusion, leading to hypertension and multiple organ damage. The current gold standard for diagnosing the disease is based on the analysis of hypertension with or without recent-onset proteinuria during the second half of pregnancy, which has limited predictive capacity. In this context, as there is an imbalance between angiogenic factors, such as placental growth factor (PlGF), and antiangiogenic factors, such as soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1), international guidelines suggest using the sFlt-1/PlGF ratio test to aid in the diagnosis of PE, wich demonstrates better predictive capacity. Currently, all ANVISA approved products to determine sFlt-1 and PlGF levels are imported, leading to external technology dependence and increases healthcare costs. Therefore, it was proposed the development of an ELISA to determine plasma sFlt-1 levels in pregnant women at high risk of PE onset. The following parameters were defined: capture antibody concentration of 2 μg/mL, biotin-conjugated antibody concentration of 500 ng/mL, 1:200 dilution for peroxidase-conjugated streptavidin, the use of undiluted samples obtained from serum or plasma collected in EDTA, heparin, or citrate tubes, an incubation temperature of 37°C for the sample, biotin-conjugated antibody, and peroxidase-conjugated streptavidin, a 45-minute incubation time for the sample and biotin-conjugated antibody, three cycles in the washing step, and solid phase and biotin-conjugated antibody stability of 1.09 years at 5°C. Formulations for sensitization, blocking, washing, stopping, and biotin-conjugated antibody and peroxidase-conjugated streptavidin diluent solutions were also defined. After establishing these parameters, the developed diagnostic kit was found to be suitable for determining the serum concentration of sFlt-1 in pregnant women who have developed PE. |
Idioma: | por |
País: | Brasil |
Editor: | Universidade Federal de Minas Gerais |
Sigla da Instituição: | UFMG |
Departamento: | FARMACIA - FACULDADE DE FARMACIA |
Curso: | Programa de Pós-Graduação em Análises Clínicas e Toxicológicas |
Tipo de Acesso: | Acesso Restrito |
URI: | http://hdl.handle.net/1843/60705 |
Data do documento: | 31-Out-2023 |
Término do Embargo: | 31-Out-2025 |
Aparece nas coleções: | Dissertações de Mestrado |
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Arquivo | Descrição | Tamanho | Formato | |
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Mara.pdf Até 2025-10-31 | 4.18 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir Solictar uma cópia |
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