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http://hdl.handle.net/1843/64950
Type: | Tese |
Title: | Padronização de técnica de PCR em tempo real para detecção simultânea das mutações H63D e S65C no gene HFE da hemocromatose |
Authors: | FREDERICO SCOTT VARELLA MALTA |
First Advisor: | Antônio Carlos Vieira Cabral |
First Referee: | Ana Paula Brum Miranda Lopes |
Second Referee: | Zilma Silveira Nogueira Reis |
Third Referee: | Marina Lobato Martins |
metadata.dc.contributor.referee4: | Fabíola de Andrade Caxito |
Abstract: | A hemocromatose é a desordem genética mais comum em europeus. Está distribuída em todo o mundo sendo que nas populações mais afetadas a prevalência pode chegar a 1: 220-250 indivíduos. Ainda é uma desordem subdiagnosticada, tanto por ser considerada rara quanto pelo fato de que é descoberta quando as manifestações da doença estão totalmente estabelecidas como a cirrose, diabetes e pigmentação da pele. A confirmação do diagnóstico de hemocromatose antes do desenvolvimento de cirrose ou outras manifestações avançadas dessa desordem pode garantir que providências sejam tomadas para a manutenção da qualidade de vida do paciente. Atualmente, os guias especializados no diagnóstico e tratamento da hemocromatose recomendam a utilização de testes genéticos para o gene HFE para o auxílio na tomada de decisão nos cuidados médicos com o paciente. Portanto o desenvolvimento de novas metodologias para a identificação de mutações é um importante passo para o fornecimento de ferramentas que auxiliem os médicos. Nosso trabalho teve o objetivo de desenvolver um ensaio de PCR 5’ Nuclease com detecção em tempo real simultâneo para as mutações H63D e S65C. A utilização de sondas capazes de identificar dois polimorfismos simultaneamente em um ensaio de PCR 5’ Nuclease jamais foi relatado antes na literatura. O ensaio foi planejado com a ajuda de ferramentas de bioinformática, em seguida padronizado e validado seguindo recomendações de guias especializados na área de genética molecular. O ensaio validado também está adequado às recomendações de dois guias de boas práticas para o diagnóstico de hemocromatose. Todas as características de desempenho testadas do ensaio de PCR 5’Nuclease para detecção simultânea das mutações H63D e S65C foram validadas com sucesso e o ensaio foi considerado apto a ser utilizado na prática clínica. |
Abstract: | Hemochromatosis is the most common genetic disorder in Caucasians. Its geographic distribution is worldwide, but it is seen most commonly in some populations in which it occurs with a prevalence of approximately 1 per 220-250 individuals. It is still underdiagnosed, because it is often considered a rare disorder that is manifested by the clinical findings seen in fully established disease consisting of cirrhosis, diabetes, and skin pigmentation. The diagnosis of hemochromatosis before the development of advanced cirrhosis or other manifestations of this disorder can ensure that steps are taken to maintain the quality of life of the patient. Currently, the guide specialized in the diagnosis and treatment of hemochromatosis recommend the use of genetic testing for HFE gene to aid in decision making in health care of patient. Therefore the development of new methodologies for the identification of mutations is an important step towards providing tools that aid physicians. Our study had the objective to develop a PCR 5 'Nuclease assay to detection in real time simultaneously H63D and S65C mutations. The use of probes in PCR 5 'Nuclease assay able to identify two polymorphisms simultaneously was never been seen before in the literature. The test was planned with the help of bioinformatics tools and then standardized and validated following recommendations of expert guides in the area of molecular genetics.The assay is also suitable validated following recommendations of two guides to good practice for the diagnosis of hemochromatosis. All performance characteristics tested for PCR 5'Nuclease assay for simultaneous detection of the mutations H63D and S65C have been successfully validated and the test can be used in clinical practice. |
Subject: | Hemocromatose Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real Técnicas de Diagnóstico Molecular Mutação Técnicas de Laboratório Clínico |
language: | por |
metadata.dc.publisher.country: | Brasil |
Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
Publisher Initials: | UFMG |
metadata.dc.publisher.department: | MED - DEPARTAMENTO DE GINECOLOGIA OBSTETRÍCIA |
metadata.dc.publisher.program: | Programa de Pós-Graduação em Saúde da Mulher |
Rights: | Acesso Aberto |
URI: | http://hdl.handle.net/1843/64950 |
Issue Date: | 17-Dec-2012 |
Appears in Collections: | Teses de Doutorado |
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