Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/1843/64956
Type: Dissertação
Title: Atividade enzimática em achatina fulica após infecção por angiostrongylus vasorum
Other Titles: Enzymatic activity in achatina fulica after infection with angiostrongylus vasorum
Authors: NATALIA DO CARMO GONCALVES
First Advisor: Cintia Aparecida de Jesus Pereira
metadata.dc.contributor.advisor2: Walter dos Santos Lima
Abstract: O objetivo deste trabalho foi caracterizar atividade enzimática de N-acetil-β-Dglicosaminidase-like (NAG-like) e mieloperoxidase-like (MPO-like) em hemócitos e em tecidos da região cephalopodal de Achatina fulica infectados por Angiostrongylus vasorum. Foram utilizados 120 Achatina fulica: 40 moluscos para o Grupo ingestão de L1 – larvas de primeiro estádio de A. vasorum; 40 moluscos para o Grupo inoculação de L1; 40 moluscos para o Grupo controle (Não infectados). Os moluscos foram infectados individualmente com 1000 L1/24h obtidas a partir da técnica de Baermann de cães infectados conforme o protocolo CEUA_UFMG 227/2022. Após a infecção, os moluscos foram transferidos para aquários, alimentados com alface e ração contendo carbonato de cálcio, sendo observada sua sobrevivência. No 1º, 8º e 30º dias após a infecção foi avaliada a ativação dos hemócitos, por meio da coleta de hemolinfa por punção cardíaca e um grama de tecidos da região cephalopodal e realização de testes enzimáticos. Para os testes da NAG-like e MPO-like, a preparação em 40 mg do tecido ocorreu em soluções com pH semelhantes, no entanto, a evidência da enzima ocorre para o ensaio de N-acetil-β-D-glicosaminidase-like adicionou-se o substrato p-nitrofenilN-acetil-β- D-glicosamina a 37°c por 10 min e a estimativa da atividade foi a 405 nm. Para o ensaio enzimático de mieloperoxidase-like, o substrato foi 3,3´, 5,5´- tetrametilbenzidina e a leitura revelada a 450 nm. Na coloração de peroxidase 1 x 105 hemócitos foram monitorados para a expressão de peroxidase resistente ao cianeto após fixar celulas em formol a 4% com acetona por 30 segundos e corado por 10 min em fosfato tampão contendo 3,3 tetracloridrato de diaminobenzidina (0,25%), peróxido de hidrogênio (H2O2) e cianeto de potássio (KCN) - 0,2% ao abrigo de luz. Após análises observou-se que A.fulica desafiada por A. vasorum apresenta atividade enzimática semelhante a MPO e NAG.
Abstract: The objective of this work was to characterize the enzymatic activity of N-acetyl-β-Dglycosaminidase -ike (NAG-like) and myeloperoxidase-like (MPO-like) in hemocytes and in tissues of the cephalopodal region of Achatina fulica infected by Angiostrongylus vasorum. 120 Achatina fulica were used: 40 mollusks for the L1 ingestion Group - first stage larvae of A. vasorum; 40 mollusks for the L1 inoculation Group; 40 mollusks for the control Group (Not infected). Mollusks were individually infected with 1000 L1/24h obtained from Baermann's technique from infected dogs according to CEUA_UFMG protocol 227/2022. After infection the mollusks were transferred to aquariums, fed with lettuce and feed containing calcium carbonate and their survival was observed. On the 1st, 8th, and 30th day after infection, hemocyte activation was evaluated by collecting hemolymph by cardiac puncture and one gram of tissue from the cephalopodal region, and enzymatic tests were performed. For the NAG-like and MPO-like tests, 40 mg of tissue was prepared in solutions with similar pH; however, for the N-acetyl-β-D-glycosaminidase assay, the substrate p-nitrophenyl-N-acetyl-β-Dglycosamine was added at 37°c for 10 min and the activity was estimated at 405 nm. For the myeloperoxidase-like enzyme assay the substrate was 3,3', 5,5'- tetramethylbenzidine and the reading revealed at 450 nm. For peroxidase staining 1 x 105 hemocytes hemocytes were monitored for cyanide-resistant peroxidase expression after fixing cells in 4% formalin with acetone for 30 seconds and stained for 10 min in phosphate buffer containing diaminobenzidine 3,3 tetrachlorhydrate (0.25%), hydrogen peroxide (H2O2), potassium cyanide (KCN) - 0.2% under shelter from light. After analysis it was observed that A. fulica challenged by A. vasorum showed similar enzymatic activity to MPO, NAG
Subject: Parasitologia
Acetiglucosaminidase
Peroxidase
Caramujos
Angiostrongylus
language: por
metadata.dc.publisher.country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials: UFMG
metadata.dc.publisher.department: ICB - DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIA
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-Graduação em Parasitologia
Rights: Acesso Aberto
URI: http://hdl.handle.net/1843/64956
Issue Date: 26-May-2023
Appears in Collections:Dissertações de Mestrado

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