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Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/1843/65278
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dc.contributor.advisor1Dawidson Assis Gomespt_BR
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/7990397233201223pt_BR
dc.contributor.advisor-co1Jerusa Araújo Quintão Arantes Fariapt_BR
dc.contributor.referee1André Ricardo Massensinipt_BR
dc.contributor.referee2Maria Elena de Lima Perez Garciapt_BR
dc.contributor.referee3Deborah Schechtmanpt_BR
dc.contributor.referee4Claure Nain Lunardi Gomespt_BR
dc.creatorMarianna Kunrath Limapt_BR
dc.creator.Latteslattes.cnpq.br/6820540063118574pt_BR
dc.date.accessioned2024-03-05T17:38:18Z-
dc.date.available2024-03-05T17:38:18Z-
dc.date.issued2018-02-05-
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/1843/65278-
dc.description.abstractCa2+ is an important second messenger within cells, and it is involved in many cellular processes, like death and proliferation. The raise in intracellular Ca2+ levels can be due to the generation of inositol 1, 4, 5-trisphosphate (InsP3), which is a product of phosphatidylinositol 4, 5-bisphosphate (PIP2) hydrolysis by phospholipases C (PLCs) that leads to Ca2+ release by InsP3R. Ca2+ release can occur in both cytosol and nucleus, via PLCs, but little is known about these enzymes’ activation in the nucleus. The objective of this work was to study PLCδ4 function in mesenchymal cells. This protein, which has not been extensively studied, has been pointed out as nuclear and it has a possible role in proliferative processes. In this thesis, two human mesenchymal cell models were used to phenotypically characterize human PLCδ4 (hPLCδ4): SK-HEP-1 tumor cells and human adipose-derived stem cells (hASC). In SK-HEP-1, hPLCδ4 silencing by siRNA reduced cell proliferation, without cell death increase, but with an increase in the percentage of cells on G1 and G2/M cell cycle phases and reduction in the expression of cyclins A, B1 and H. For hASC, initially we proceeded to the subcellular localization of hPLCδ4, using confocal microscopy. This protein showed to be mainly nuclear, being the nuclear presence of hPLCδ4 confirmed by cell fractionation. When hASC were submitted to cell differentiation, it was observed an increase in PLCδ4 protein expression after adipogenic differentiation, but this increase was not observed for cells that were incubated with osteogenic inducers. hASC PLCδ4 knockdown, as for SK-HEP-1, showed reduced cell proliferation, without cell death increase. However, for silenced cells it was observed an increase of cells on G1 and a reduction of cells on interphase and G2/M. PLCδ4 silencing increased the percentage of senescent cells in hASC, what could explain the reduction in cell proliferation. Thus, these data show that human PLCδ4 is in involved in cellular differentiation and cellular proliferation, being these processes possibly mediated by nuclear Ca2+.pt_BR
dc.description.resumoO Ca2+ é um importante segundo mensageiro que está envolvido na regulação de diversos processos celulares, como morte e proliferação. O aumento dos níveis intracelulares de Ca2+ pode se dar pela geração de inositol 1, 4, 5-trisfosfato (InsP3), resultante da hidrólise de fosfatidilinositol 4, 5-bisfosfato (PIP2) por fosfolipases C (PLCs), que leva à liberação de Ca2+ pelos receptores de InsP3 (InsP3R). A liberação de Ca2+ pode acontecer tanto no citosol quanto no núcleo, via PLCs, mas pouco se conhece sobre a ativação destas proteínas no núcleo. O objetivo deste trabalho foi estudar a função da PLCδ4 em células mesenquimais. Esta proteína tem sido apontada como uma proteína nuclear e parece estar envolvida em processos proliferativos. Nesta tese, foram utilizadas duas células humanas mesenquimais: as células tumorais SK-HEP-1 e células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo (hASC) para a caracterização fenotípica de PLCδ4 humana (hPLCδ4). Em SK-HEP-1, o silenciamento de hPLCδ4 por RNA de interferência reduziu a proliferação celular, sem aumento da morte celular, mas com aumento da porcentagem de células nas fases G1 e G2/M do ciclo celular e redução da expressão das ciclinas A, B1 e H. Em hASC, primeiramente foi feita a localização subcelular de hPLCδ4, utilizando-se microscopia confocal. Esta proteína mostrou-se predominantemente nuclear, e ensaios de fracionamento celular também mostraram a presença de hPLCδ4 no núcleo de hASC. Em análises de expressão proteica após diferenciação celular, foi visto que a expressão de PLCδ4 aumentou com a diferenciação adipogênica, mas não com a diferenciação osteogênica. O knockdown de PLCδ4 em hASC, assim como em SK-HEP-1, diminuiu a proliferação celular, sem aumento da morte celular. Entretanto, para as células silenciadas foi observado um aumento do número de células apenas na fase G1 do ciclo celular, com redução do número de células em interfase e G2/M. A redução da expressão de PLCδ4 em hASC levou a um aumento da porcentagem de células senescentes, o que poderia explicar a redução da proliferação destas células. Desse modo, os resultados obtidos mostram que a PLCδ4 humana está envolvida em processos de proliferação e diferenciação celular, sendo estes processos possivelmente mediados pelo Ca2+ nuclear.pt_BR
dc.description.sponsorshipCNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológicopt_BR
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de Minas Geraispt_BR
dc.publisher.countryBrasilpt_BR
dc.publisher.departmentICB - DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E IMUNOLOGIApt_BR
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Bioquímica e Imunologiapt_BR
dc.publisher.initialsUFMGpt_BR
dc.rightsAcesso Abertopt_BR
dc.subjectPLCδ4 humanapt_BR
dc.subjectSinalização de cálcio nuclearpt_BR
dc.subjectSinalização de cálciopt_BR
dc.subjectProliferação celularpt_BR
dc.subjectDiferenciação celularpt_BR
dc.subjectSenescência celularpt_BR
dc.subject.otherBioquímica e imunologiapt_BR
dc.subject.otherSinalização do Cálciopt_BR
dc.subject.otherProliferação de Célulaspt_BR
dc.subject.otherDiferenciação Celularpt_BR
dc.subject.otherSenescência Celularpt_BR
dc.subject.otherFosfolipase C deltapt_BR
dc.titleFosfolipase C delta 4 humana (hPLCδ4): uma proteína envolvida na proliferação e na diferenciação celularpt_BR
dc.title.alternativeHUMAN PHOSPOLIPASE DELTA 4 (hPLCδ4): an protein involved in cellular proliferation and differentiationpt_BR
dc.typeTesept_BR
dc.identifier.orcid0000-0002-5012-7566pt_BR
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