Identificação de espermátides em testículo humano pelo método de sonicação para aplicação em reprodução assistida

Lilian Massara Martinelli

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/1843/65654

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DC Field	Value	Language
dc.contributor.advisor1	Hélio Chiarini-Garcia	pt_BR
dc.contributor.advisor1Lattes	http://lattes.cnpq.br/4371704508612354	pt_BR
dc.contributor.advisor2	Augusto Barbosa Reis	pt_BR
dc.creator	Lilian Massara Martinelli	pt_BR
dc.creator.Lattes	http://lattes.cnpq.br/1481744733664211	pt_BR
dc.date.accessioned	2024-03-11T16:35:52Z	-
dc.date.available	2024-03-11T16:35:52Z	-
dc.date.issued	2016-07-29	-
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/1843/65654	-
dc.description.abstract	Azoospermia is an infertility condition characterized by the absence of spermatozoa in the ejaculate. In many cases, paternity can only be achieved by assisted reproduction, i.e. with testicular sperm extraction and subsequent intracytoplasmic spermatozoa injection (ICSI), a process known as in vitro fertilization. For spermatozoa extraction manual mechanical fragmentation of testicular parenchyma and search of spermatozoa under light microscope are frequently used with no complete success. However, it is unknown whether the fact of not having found sperm is by their absence in the testis or failure in the search method. This study evaluated the efficacy of sonication method of testicular fragments, employing dissociation of testicular tissue and degeneration of cells, with the exception of elongated spermatid heads, in order to determine more accurately the presence of this cell type in the testis of patients with azoospermia. Histopathological analysis of the testes showed that in all patients, the testes were similar, with typical hypospermatogenesis (Johnsen score ~ 8). The preservation of the spermatid heads after sonication using different combinations of frequency and time, was verified by the method of concentration of the sonication product by Cytospin followed by staining with the kit Panotic. The combination 60Hz/90s of sonication proved to be the best to keep the integrity of the heads of spermatids besides the elimination of other cell types. When carried out the prediction of sperm production from spermatid heads counting, it was found that there was no difference between the different combinations of frequency and time tested, regardless of the microscopy used for counting, fluorescence or phase-contrast. Thus, all combinations could be applied, however, taking in account the better preservation of isolated intact spermatid heads, attested by Cytospin method, we suggest the combination 60Hz / 90s to predict sperm production.	pt_BR
dc.description.resumo	Azoospermia é uma condição de infertilidade caracterizada pela ausência de espermatozoides no ejaculado. Em muitos casos, a paternidade só pode ser alcançada com o auxílio da reprodução assistida, isto é, com a extração de espermatozoides de fragmentos testiculares e posterior injeção intracitoplasmática dos mesmos (ICSI), processo conhecido como fertilização in vitro. Para extração dos espermatozoides têmse utilizado métodos de busca sob microscópio de luz, através de fragmentação mecânica manual, muitas vezes sem sucesso. No entanto, não se sabe se o fato de não ter encontrado espermatozoides é por ausência dos mesmos no testículo ou por falha no método de busca. O presente estudo avaliou a eficácia do método de sonicação de fragmentos testiculares, que emprega dissociação do tecido testicular e degeneração de células, com exceção das cabeças de espermátides alongadas, visando determinar com mais acurácia a presença desse tipo celular nos testículos de pacientes com azoospermia. A análise histopatológica dos testículos mostrou que em todos os pacientes, os testículos apresentavam características semelhantes, típicas de hipoespermatogênese (escore de Johnsen ~ 8). A preservação das cabeças de espermátides após sonicação, em diferentes combinações de frequência e tempo, foi verificada pelo método de concentração, por Cytospin, do homogeneizado em lâmina, seguido de coloração com kit Panótico. A combinação de 60Hz por 90s de sonicação mostrou ser a melhor para manter íntegras as cabeças de espermátides e eliminar demais tipos celulares. Quando se realizou a predição da produção espermática a partir da contagem de cabeças de espermátides obtidas por sonicação, verificou-se que não houve diferença entre as diferentes combinações de frequência e tempo testadas, independente da microscopia utilizada para a contagem, fluorescência ou contraste de fase. Dessa forma, todas as combinações poderiam ser aplicadas, no entanto, levando-se em conta a maior preservação de espermátides íntegras isoladas, atestada pelo método do Cytospin, sugere-se a combinação 60Hz/90s para a predição da produção espermática.	pt_BR
dc.language	por	pt_BR
dc.publisher	Universidade Federal de Minas Gerais	pt_BR
dc.publisher.country	Brasil	pt_BR
dc.publisher.department	ICB - DEPARTAMENTO DE MORFOLOGIA	pt_BR
dc.publisher.program	Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular	pt_BR
dc.publisher.initials	UFMG	pt_BR
dc.rights	Acesso Aberto	pt_BR
dc.rights.uri	http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/	*
dc.subject	Azoospermia	pt_BR
dc.subject	Espermátides	pt_BR
dc.subject	Testículos	pt_BR
dc.subject.other	Biologia Celular	pt_BR
dc.subject.other	Azoospermia	pt_BR
dc.subject.other	Espermátides	pt_BR
dc.subject.other	Testículos	pt_BR
dc.title	Identificação de espermátides em testículo humano pelo método de sonicação para aplicação em reprodução assistida	pt_BR
dc.type	Dissertação	pt_BR
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