Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/1843/65897
Type: Dissertação
Title: Grupo interdisciplinar de pesquisa em HTLV-1 e 2: Pesquisa do vírus HTLV-1 em biópsias de pele de indivíduos soropositivos: aspectos ultraestruturais e moleculares
Authors: Olga Maria Carvalho Pfeilsticker
First Advisor: Erna Geesien Kroon
metadata.dc.contributor.advisor2: Anna Bárbara de Freitas
Abstract: O vírus HTLV-1 pode ser considerado um vírus emergente se levarmos em conta que a cada dia novos isolados virais vão sendo caracterizados. Por exemplo, os grupos e e f, na África Central, caracterizados por SALEMI et al. (1998) e suportados pela análise filogenética, demonstraram terem evoluído através de transmissões inter-espécies entre humanos e símios que ocorrem desde os tempos mais remotos e que ainda podem estar ocorrendo. De 10 a 20 milhões de pessoas se encontram infectadas ao redor do mundo e os aspectos da interação vírus-hospedeiro, bem como a caracterização molecular dos isolados virais das regiões endêmicas, são de suma importância para o estudo da epidemiologia e das formas de controle, prevenção e tratamento dessa virose. Os isolados virais objetos deste trabalho foram obtidos de biópsias de pele de indivíduos soropositivos para o HTLV-1 e com manifestação dermatológica de dermoepidermite crônica. Após extração do DNA genômico das biópsias de pele destes indivíduos foi feita a “nested” PCR de parte do gene env do HTLV-1. Das biópsias de pele, 90% deram resultado de PCR positivo, corroborando o teste sorológico positivo para o HTLV-1 nestes indivíduos. O alvo principal do HTLV-1 é o linfócito T CD4+, presente em grande proporção no infiltrado, e que permanece imortalizado após ter sido infectado. A proteína tax do HTLV-1 é responsável pela transcrição e indução de vários genes celulares, tais como citocinas, quimiocinas e moléculas de adesão que são essenciais para a disseminação e localização tecidual destes linfócitos. A microscopia eletrônica de transmissão destas biópsias foi realizada com a finalidade de verificar preliminarmente a presença do HTLV-1, e de observar a morfologia ultraestrutural das células do infiltrado e sua localização tecidual. Células mononucleares foram encontradas infiltrando as papilas dérmicas e regiões peri-vasculares, tendo sido observada a migração destas células para a epiderme. Elas apresentaram núcleo convoluto, endentado, com nucléolo evidente e prolongamentos citoplasmáticos aumentados. Também foi observada a presença de vacúolos em algumas células. A lise celular estava quase ausente. Estruturas com diâmetro variando de 100 nm a 400 nm e características ultraestruturais da partícula do HTLV-1, foram observadas próximas ou brotando da membrana citoplasmática de células com características morfológicas ultraestruturais da série linfóide e de fibroblastos. Uma linhagem celular de cordão umbilical transformada pelo HTLV-1, MT-2, foi usada como controle positivo das técnicas realizadas. Como controle negativo foram obtidos fragmentos de pele normal de indivíduo submetido à cirurgia plástica reparadora de mama.Os achados deste trabalho corroboram a hipótese de que a pele é um dos órgãos alvo do HTLV-1. Este vírus continua se multiplicando nos compartimentos da pele e causando uma reação inflamatória crônica local nos indivíduos infectados, cuja finalidade é a tentativa de controlar a infecção. De acordo com dados mundiais existe um risco de 1% a 5 % dos indivíduos infectados desenvolverem alguma doença associada ao HTLV-1, de 40 a 50 anos após a infecção. Como em nosso meio a idade deste comprometimento tem sido menor, torna-se necessário a caracterização molecular destes isolados virais visando um melhor entendimento da epidemiologia do HTLV-1 em nosso meio. Após a clonagem e seqüenciamento do segmento amplificado de parte do gene env do HTLV-1, e posterior análise filogenética., os resultados apurados demonstraram que os isolados virais analisados pertencem ao grupo Cosmopolita a, sub-grupo transcontinental A, que é um genótipo de maior prevalência e distribuição no Brasil e no mundo. Esta pesquisa faz parte de um estudo transversal de coorte aberta dos indivíduos da Fundação HEMOMINAS de Belo Horizonte, com sorologia positiva para o HTLV-1, que já conta com mais de 500 indivíduos cadastrados e acompanhados de 2 em 2 anos. Portanto está inserido dentro de um projeto maior desenvolvido pelo GIPH, Grupo Interdisciplinar de Pesquisa em HTLV-1 e 2, do qual eu faço parte, e envolve vários profissionais de várias áreas e de diversas instituições de pesquisa tais como a Fundação HEMOMINAS de Belo Horizonte, a UFMG e o Hospital Sara Kubistchek. Os resultados deste estudo serão de imenso valor para se conhecer melhor as manifestações do HTLV-1 na pele dos portadores do HTLV-1 em nosso meio. Dessa forma, poderemos realizar um controle e tratamento mais eficiente das doenças relacionadas.
Abstract: The virus HTLV-1 can be considered an emerging virus if we take into account that each day new viral isolates are characterized. For example, groups e and f, in Central Africa, characterized by SALEMI et al. (1998) and supported by phylogenetic analysis, showed they have evolved through interspecies transmissions among humans and apes occurring since ancient times and that may still be occurring. Of 10 to 20 million people are infected around the world and aspects of virus-host interaction, as well as the molecular characterization of viral isolates of endemic regions, are of paramount importance for the study of epidemiology and forms of control, prevention and treatment of this virus. The viral isolates objects in this work were obtained from skin biopsies of seropositive individuals for HTLV-1 and with dermatological manifestation of chronic disease. After extraction of genomic DNA from skin biopsies of these individuals was made the PCR "nested" of part of the HTLV-1 env gene. Of skin biopsies, 90% gave positive PCR result, corroborating the serological test positive for HTLV-1 in these individuals. The main target of HTLV-1 is the CD4+ T lymphocyte, present in large proportion in inflammatory infiltrate, and that remains immortalized after being infected. The tax protein of HTLV-1 is responsible for transcription and induction of several cellular genes, such as cytokines, chemokines and adhesion molecules that are essential for dissemination and tissue localization of these lymphocytes. Transmission electron microscopies of these biopsies were performed in order to verify the presence of preliminarily HTLV-1, and observe the ultrastructural morphology of inflammatory infiltrate cells and tissue location. Mononuclear cells were found infiltrating the dermal papillae and peri-vascular regions, having been observed migration of these cells to the epidermis. They presented a convoluted nucleus, indentation, with evident nucleoli and increased cytoplasmic extensions. It was also observed the presence of vacuoles in some cells. The cell lysis was almost absent. Structures with a diameter ranging from 100 nm to 400 nm and ultrastructural characteristics of particle of HTLV-1, were observed near or springing from the cytoplasmic membrane of cells with ultrastructural lymphoid series and fibroblasts morphologic characteristics. An umbilical cord cell line transformed by the HTLV-1, MT-2, was used as positive control techniques performed. As negative control were obtained fragments of normal skin from individual subjected to breast reconstructive plastic surgery. The findings of this study support the hypothesis that the skin is one of the target organs of HTLV-1. This virus keeps multiplying in magazines of the skin and causing a chronic inflammatory reaction site in infected individuals, whose purpose is to attempt to control the infection. According to global data there is a risk of 1% to 5% of infected individuals develop any disease associated with HTLV-1, of 40 to 50 years after infection. As in our middle age of this commitment has been minor, it becomes necessary to the molecular characterization of these viral isolates aiming at a better understanding of the epidemiology of HTLV-1 in our midst. After the cloning and sequencing of amplified segment of part of the HTLV-1 env gene, and subsequent phylogenetic analysis, the results obtained have shown that the viral isolates analyzed pertain to the Cosmopolitan group a, transcontinental sub-group A, which is a genotype of higher prevalence and distribution in Brazil and in the world. This research is part of a cross-sectional study of open cohort of individuals HEMOMINAS Foundation of Belo Horizonte, with positive serology for HTLV-1, which already has more than 500 individuals registered and accompanied at two- year intervals. So is inserted within a larger project developed by the GIPH, Interdisciplinary Group of Research in HTLV-1 and 2, of which I am part, and involves various professionals from various areas and various research institutions such as the HEMOMINAS Foundation of Belo Horizonte, the UFMG and the Sara Kubitschek Hospital. The results of this study will be of immense value to know better the manifestations of HTLV-1 in skin of the carriers of HTLV-1 in our midst. In this way, we can perform a control and more efficient treatment of related diseases.
Subject: Microbiologia
Dermatopatias
Infecções por Deltaretrovirus
Ultraestrutura
language: por
metadata.dc.publisher.country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials: UFMG
metadata.dc.publisher.department: ICB - INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLOGICAS
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-Graduação em Microbiologia
Rights: Acesso Aberto
metadata.dc.rights.uri: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/
URI: http://hdl.handle.net/1843/65897
Issue Date: 17-Dec-2002
Appears in Collections:Dissertações de Mestrado

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Dissertação Mestrado Olga.pdf4.18 MBAdobe PDFView/Open


This item is licensed under a Creative Commons License Creative Commons