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Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/1843/69566
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dc.contributor.advisor1Adriana Oliveira Costapt_BR
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/0852677210786052pt_BR
dc.contributor.advisor-co1Rodrigo Pedro Pinto Soarespt_BR
dc.contributor.referee1Claudia Masini d'Avilapt_BR
dc.contributor.referee2Patricia Xander Batistapt_BR
dc.contributor.referee3Cristiane Alves da Silva Menezespt_BR
dc.contributor.referee4Hélida Monteiro de Andradept_BR
dc.creatorIsabela Aurora Rodriguespt_BR
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/1684736955046581pt_BR
dc.date.accessioned2024-07-02T14:46:07Z-
dc.date.available2024-07-02T14:46:07Z-
dc.date.issued2021-05-28-
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/1843/69566-
dc.description.abstractAmoebas of the genus Acanthamoeba are free-living protozoa widely dispersed in the environment. In some situations, they can adopt a parasitic lifestyle and acts as pathogens that cause serious infections in humans. The ability of Acanthamoeba to cause infectionsinvolves factors as the production of proteases, which can be released freely in the environment or, as shown in recent studies, compartmentalized in extracellular vesicles(EVs). However, the comparative characterization of EVs of different strains has not yet been described.This study aimed to compare EVs produced by Acanthamoeba from different genotypes, evaluating physical features, profile of proteases and of nitric oxide and cytokines production after stimulation of murine macrophages. Four strains with different pathogenic characteristics were used: three from an environmental origin (samples of genotypes T1, T2, T11) and one obtained from a keratitis case (sample of genotype T4). Despite their genotype, all strains released EVs with no differences in size or concentration. EVs exhibited a predominant activity of serine proteases (pH 7.4 and 3.5), with more intense activity in those from T4 and T1 strains. Despite their genotype, all strains released EVs with no differences in size or concentration. EVs exhibited a predominant activity of serine proteases (pH 7.4 and 3.5), with more intense activity in those from T4 and T1 strains. Compared with pathogenic (T4 and T1) and moderately pathogenic (T2) strains, EVs from the environmental, nonpathogenic T11 strain exhibited a more proinflammatory profile, inducing higher levels of NO, tumor necrosis, and interleukin-6 via TLR4/TLR2. Preincubation with EVs treated with protease inhibitors or heating drastically decreased nitrite concentration production in macrophages. Altogether, these data indicated that EVs from Acanthamoeba exhibit immunomodulatory effects related to their pathogenic potential and dependent on the integrity of the proteases.pt_BR
dc.description.resumoAs amebas do gêneroAcanthamoeba são protozoários de vida livre amplamente dispersos no ambiente. Em algumas situações, elas são capazes de se adaptar a um tipo de vida parasitária, se transformando em patógenos que causam graves infecções em humanos. A capacidade de Acanthamoebacausar infecções por Acanthamoeba envolve fatores como a produção de proteases, que podem ser liberadas livremente no meio ambiente ou, conforme demonstrado em estudos recentes, compartimentadas em vesículas extracelulares (VEs). No entanto, a caracterização comparativa das VEs de diferentes cepasainda não foi descrita. O objetivo deste estudo foi realizar a comparação entre VEs produzidas por Acanthamoebade diferentes genótipos, avaliando as características físicas, perfil de proteases e de produção de óxido nítrico e citocinas após estimulação de macrófagos murinos. Foram utilizadas quatro cepas com diferentes características de patogenicidade, sendo três de origem ambiental (amostras de genótipos T1, T2, T11)e uma de caso de ceratite amebiana (amostra de genótipo T4). As VEs foram obtidas por ultracentrifugação, quantificadas por análise de rastreamento de nanopartículas e analisadas por microscopia eletrônica de varredura e transmissão. O perfil de proteases das VEs foi determinado por zimografia. A produção de óxido nítrico e citocinas por macrófagos peritoneais de murinosfoi medida após estimulação com VEs, usando camundongos de linhagens selvagens (BALB/c e C57BL/6) e nocautes para TLR2 e TLR4 (C57BL/6 TLR2 /- e TLR4 -/-). Todas as cepas, independentemente do genótipo, liberaram VEs e não houve diferença no tamanho ou concentração entre elas. As VEs exibiram atividade predominante de serinoproteases (pH 7,4 e 3,5), com atividade mais intensa nas cepas T4 e T1. As VEs da cepa ambiental não patogênica T11 exibiram um perfil mais pró-inflamatório, induzindo níveis mais elevados de óxido nítrico, fator de necrose tumoral alfa e interleucina-6, via TLR4 / TLR2, do que aquelas cepas com características patogênicas (T4, T1) e moderadamente patogênica (T2). A produção de óxido nítricopor macrófagos foi significativamente menorquando esses foram interagidos com VEs préincubadas com inibidores de proteases ou inativadas por aquecimento. Em conjunto, esses dados indicam que VEs de Acanthamoebaexibem efeitos imunomoduladores queestão relacionados a seu potencial patogênico e que são dependentes da integridade das proteases.pt_BR
dc.description.sponsorshipFAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Geraispt_BR
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de Minas Geraispt_BR
dc.publisher.countryBrasilpt_BR
dc.publisher.departmentFARMACIA - FACULDADE DE FARMACIApt_BR
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Análises Clínicas e Toxicológicaspt_BR
dc.publisher.initialsUFMGpt_BR
dc.rightsAcesso Abertopt_BR
dc.subjectGenótipospt_BR
dc.subjectImunidade inatapt_BR
dc.subjectProteasespt_BR
dc.subjectInteração parasita-hospedeiropt_BR
dc.titleAvaliação funcional de vesículas extracelulares de acanthamoebade diferentes genótipos.pt_BR
dc.typeTesept_BR
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