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http://hdl.handle.net/1843/69566| Tipo: | Tese |
| Título: | Avaliação funcional de vesículas extracelulares de acanthamoebade diferentes genótipos. |
| Autor(es): | Isabela Aurora Rodrigues |
| Primeiro Orientador: | Adriana Oliveira Costa |
| Primeiro Coorientador: | Rodrigo Pedro Pinto Soares |
| Primeiro membro da banca : | Claudia Masini d'Avila |
| Segundo membro da banca: | Patricia Xander Batista |
| Terceiro membro da banca: | Cristiane Alves da Silva Menezes |
| Quarto membro da banca: | Hélida Monteiro de Andrade |
| Resumo: | As amebas do gêneroAcanthamoeba são protozoários de vida livre amplamente dispersos no ambiente. Em algumas situações, elas são capazes de se adaptar a um tipo de vida parasitária, se transformando em patógenos que causam graves infecções em humanos. A capacidade de Acanthamoebacausar infecções por Acanthamoeba envolve fatores como a produção de proteases, que podem ser liberadas livremente no meio ambiente ou, conforme demonstrado em estudos recentes, compartimentadas em vesículas extracelulares (VEs). No entanto, a caracterização comparativa das VEs de diferentes cepasainda não foi descrita. O objetivo deste estudo foi realizar a comparação entre VEs produzidas por Acanthamoebade diferentes genótipos, avaliando as características físicas, perfil de proteases e de produção de óxido nítrico e citocinas após estimulação de macrófagos murinos. Foram utilizadas quatro cepas com diferentes características de patogenicidade, sendo três de origem ambiental (amostras de genótipos T1, T2, T11)e uma de caso de ceratite amebiana (amostra de genótipo T4). As VEs foram obtidas por ultracentrifugação, quantificadas por análise de rastreamento de nanopartículas e analisadas por microscopia eletrônica de varredura e transmissão. O perfil de proteases das VEs foi determinado por zimografia. A produção de óxido nítrico e citocinas por macrófagos peritoneais de murinosfoi medida após estimulação com VEs, usando camundongos de linhagens selvagens (BALB/c e C57BL/6) e nocautes para TLR2 e TLR4 (C57BL/6 TLR2 /- e TLR4 -/-). Todas as cepas, independentemente do genótipo, liberaram VEs e não houve diferença no tamanho ou concentração entre elas. As VEs exibiram atividade predominante de serinoproteases (pH 7,4 e 3,5), com atividade mais intensa nas cepas T4 e T1. As VEs da cepa ambiental não patogênica T11 exibiram um perfil mais pró-inflamatório, induzindo níveis mais elevados de óxido nítrico, fator de necrose tumoral alfa e interleucina-6, via TLR4 / TLR2, do que aquelas cepas com características patogênicas (T4, T1) e moderadamente patogênica (T2). A produção de óxido nítricopor macrófagos foi significativamente menorquando esses foram interagidos com VEs préincubadas com inibidores de proteases ou inativadas por aquecimento. Em conjunto, esses dados indicam que VEs de Acanthamoebaexibem efeitos imunomoduladores queestão relacionados a seu potencial patogênico e que são dependentes da integridade das proteases. |
| Abstract: | Amoebas of the genus Acanthamoeba are free-living protozoa widely dispersed in the environment. In some situations, they can adopt a parasitic lifestyle and acts as pathogens that cause serious infections in humans. The ability of Acanthamoeba to cause infectionsinvolves factors as the production of proteases, which can be released freely in the environment or, as shown in recent studies, compartmentalized in extracellular vesicles(EVs). However, the comparative characterization of EVs of different strains has not yet been described.This study aimed to compare EVs produced by Acanthamoeba from different genotypes, evaluating physical features, profile of proteases and of nitric oxide and cytokines production after stimulation of murine macrophages. Four strains with different pathogenic characteristics were used: three from an environmental origin (samples of genotypes T1, T2, T11) and one obtained from a keratitis case (sample of genotype T4). Despite their genotype, all strains released EVs with no differences in size or concentration. EVs exhibited a predominant activity of serine proteases (pH 7.4 and 3.5), with more intense activity in those from T4 and T1 strains. Despite their genotype, all strains released EVs with no differences in size or concentration. EVs exhibited a predominant activity of serine proteases (pH 7.4 and 3.5), with more intense activity in those from T4 and T1 strains. Compared with pathogenic (T4 and T1) and moderately pathogenic (T2) strains, EVs from the environmental, nonpathogenic T11 strain exhibited a more proinflammatory profile, inducing higher levels of NO, tumor necrosis, and interleukin-6 via TLR4/TLR2. Preincubation with EVs treated with protease inhibitors or heating drastically decreased nitrite concentration production in macrophages. Altogether, these data indicated that EVs from Acanthamoeba exhibit immunomodulatory effects related to their pathogenic potential and dependent on the integrity of the proteases. |
| Idioma: | por |
| País: | Brasil |
| Editor: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Sigla da Instituição: | UFMG |
| Departamento: | FARMACIA - FACULDADE DE FARMACIA |
| Curso: | Programa de Pós-Graduação em Análises Clínicas e Toxicológicas |
| Tipo de Acesso: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/69566 |
| Data do documento: | 28-Mai-2021 |
| Aparece nas coleções: | Teses de Doutorado |
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