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http://hdl.handle.net/1843/74114
Type: | Dissertação |
Title: | Estresse oxidativo e vesículas extracelulares na doença renal do diabetes |
Authors: | Sara de Castro Oliveira |
First Advisor: | Fabio Vasconcellos Comim |
Abstract: | A Doença Renal do Diabetes (DRD) é uma causa importante de morbimortalidade na população adulta com Diabetes Mellitus Tipo 1 (DM1). O desenvolvimento da DRD é complexo e multifatorial, sendo associado a desarranjos metabólicos (controle de glicose e lipídios), aumento no estado inflamatório e estresse oxidativo, ativação da cascata renina-angiotensina-aldosterona e outras anormalidades hemodinâmicas (hipo ou hiperglomerular filtração). Mais recentemente, o papel dos microRNAs transportados por vesículas extracelulares (EVs) ou circulando livremente no sangue tem sido sugerido como um novo possível mecanismo de estabelecimento da DRD. Novos marcadores têm sido explorados porque uma parte dos pacientes com DRD evolui com perda de função renal apesar de não apresentar perda de albumina urinaria. Nosso estudo explorou a associação de anormalidades em vesículas extracelulares (EVs) e marcadores de estresse oxidativo em três grupos distintos de pacientes ambulatoriais: controles normais, DM1 sem DRD e com DRD. Para este estudo, aprovado pelo comitê de ética, controles e DM1 foram recrutados nos ambulatórios de Diabetes do IPSEMG e/ou no Hospital das Clínicas da UFMG. No total, 124 participantes, 61 controles normais, 42 DM1 (sem DRD) e 21 DRD definidos de acordo com as diretrizes KDIGO foram incluídos. Os dados clínicos (antropometria, pressão arterial, presença ou não de complicações micro e macrovasculares no caso de diabetes, uso de medicamentos) e bioquímicos (glicemia, provas de função renal, aferição de medida albumina/creatinina, perfil lipídico) foram obtidos desses grupos. O isolamento e caracterização de EVs a partir do soro foram obtidos através de uma série de processos, incluindo a ultracentrifugação e a caracterização de EVs foi identificada por marcadores proteicos específicos por western blot, com a morfologia verificada por Microscópio Eletrônico de Varredura (FEI Tecnai 20; emissão LAB6; 200 kV). O tamanho e a concentração de partículas de EVs foram determinados pelo instrumento NanoSight NS300 (Malvern Panalytical, Reino Unido). O Status Oxidante Total (TOS), Capacidade Antioxidante Total (TAC), Produtos de Oxidação Avançada de Proteínas (AOPP), FRAP (Poder Antioxidante Redutor Férrico), Ácido Úrico, e os níveis de Aloxano foram determinados no soro. Como um todo, os três grupos (controle + DM1 + DM1 DRD) foram semelhantes quanto à idade (média ± DP) de 40.3 ± 13.7 anos, IMC de 25.8 ± 5.1 Kg/m2 e Circunferência Abdominal de 89.6 ± 12.3 cm. A razão albumina/creatinina foi estatisticamente diferente entre os grupos, sendo sua mediana [IC 95%]) de 4.0 [3,9-5,14] mg/g em Controles, 6.4 [5.5-10.0] mg/g em DM1 e 81.4 [48.5-1415] mg/g em DRD (p <0.001). Os indivíduos com DRD apresentaram maior pressão arterial sistólica (PAS) e uma proporção aumentada de retinopatia e neuropatia do que DM1, mas os níveis de HbA1c foram semelhantes entre os dois grupos de diabetes (DM1 e DM1+DRD). Pacientes com DRD apresentam uma Razão TOS/TAC aumentada (mmol H2O2 Equiv/L / mmol Trolox Equiv/L) (ANOVA p <0,001) superior a DM1 e controles. A média ± DP foi de 61,1 ± 31,0 em Controles, 103,0 ± 68 em DM1 e 145,0 ± 62,8 em DRD. Curiosamente, DM1 apresentou uma Razão TOS/TAC aumentada em relação aos Controles. Nenhuma modificação em AOPP ou FRAP pôde ser observada entre os três grupos. Houve uma diminuição gradual no tamanho dos EVs (mas não na concentração) em pacientes com DRD em comparação com DM1 e controles, e DM1 com controles. A média do tamanho da moda dos EVs foi (média ± SE) 144,5 ± 3,04 nm em Controles versus 136,14 ± 3,5 nm em DM1 e 135,4 ± 3,6 nm em DRD (ANOVA p = 0,04). A concentração foi (média ± SE) 4,57 x109 ± 5,57 x108 partículas/mL em Controles, 3,58 x109 ± 2,9 x108 partículas/mL em DM1 e 3,94 x109 ± 3,7 x108 partículas/mL em DRD (NS). Nossos resultados sugerem uma associação entre aumento do estresse oxidativo (razão TOS/TAC) e redução do tamanho de microvesículas na presença de DM1 e DRD. |
Abstract: | Diabetic kidney disease (DKD) is an important cause of morbimortality in the adult population with Type 1 Diabetes Mellitus (T1DM). The development of DKD is complex and multifactorial, being associated with metabolic disarrangements (glucose and lipid control), increase in inflammatory and oxidative stress status, activation of the reninangiotensin-aldosterone cascade and other hemodynamics abnormalities (hypo or hyper glomerular filtration). More recently, the role of microRNAs carried by extracellular vehicles (EVs) or freely circulating in the blood has been suggested as a new possible mechanism of DKD establishment. In this context, new markers have been explored since some patients with DKD evolve with kidney failure despite not present albuminuria. Our study explored the association of abnormalities in extracellular vehicles (EVs) and oxidative stress markers in three distinct groups of clinical outpatients: normal controls, T1DM (without DKD), and DKD. For this study, approved by the Ethics committee, controls and T1DM were recruited at the Diabetes outpatient clinics at IPSEMG and/or at Hospital das Clinicas da UFMG. Overall, 124 participants, 61 normal controls, 42 T1DM (without DKD), and 21 DKD defined according the KDIGO guidelines were included. Clinical (anthropometry data, blood pressure, evaluation of the presence of diabetes micro-and-macrovascular complications) and biochemical data (glucose levels, kidney function evaluation, albumin/creatinine ratio, lipid profile and C reactive protein) were obtained from these groups. The isolation and characterization of EVs from serum were obtained through a series of processes, including the ultracentrifugation and characterization of EVs was identified by specific protein markers by western blot morphology checked by Scanning Electron Microscope (FEI Tecnai 20; LAB6 emission; 200 kV). EVs particle size and concentration were determined by NanoSight NS300 instrument (Malvern Panalytical, UK). Total Oxidant Status (TOS), Total Antioxidant Capacity (TAC), Advanced Oxidation of Protein Products (AOPP), (Ferric Reducing Antioxidant Power), C reactive Protein, Uric Acid, Aloxan levels were determined in the serum or the plasma. The three groups (control+ DM1+ DM1 DKD) were similar regarding age (mean± SD) of 40.3 ± 13.7 years, BMI 25.8 ± 5.1 Kg/m2, and Abdominal Circumference 89.6 ± 12.3 cm. The albumin/creatinine ratio was statistically different among the groups, 10 being its (median [95%CI]) of 4.0 [3.9-5.14] mg/g in Controls, 6.4[5.5-10.0]mg/g in T1DM, and 81.4 [48.5 -1415] mg/g in DKD (p |
Subject: | Estresse Oxidativo Vesículas Extracelulares Nefropatias Diabetes Mellitus Dissertação Acadêmica |
language: | por |
metadata.dc.publisher.country: | Brasil |
Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
Publisher Initials: | UFMG |
metadata.dc.publisher.program: | Programa de Pós-Graduação em Medicina Molecular |
Rights: | Acesso Aberto |
metadata.dc.rights.uri: | http://creativecommons.org/licenses/by-nd/3.0/pt/ |
URI: | http://hdl.handle.net/1843/74114 |
Issue Date: | 21-Jun-2024 |
Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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