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http://hdl.handle.net/1843/74245
Tipo: | Tese |
Título: | Investigação do fator de transcrição SOX2 na transição epitélio-mesênquima e na progressão tumoral em modelos de estudo de melanoma |
Autor(es): | Bárbara Andrade de Carvalho |
Primeiro Orientador: | Enio Ferreira |
Segundo Orientador: | Helen Lima Del Puerto |
Primeiro Coorientador: | Istéfani Luciene Daise Silva |
metadata.dc.contributor.advisor-co2: | Patrícia Abrãao Possik |
Resumo: | No melanoma, a progressão neoplásica pode ser associada a processos que são marcas nos cânceres: resistência à apoptose, transição epitélio-mesênquima (TEM), proliferação exacerbada e indiferenciação celular. Outros marcadores envolvidos na maturação celular e comumente desregulados na carcinogênese são os genes que codificam fatores de transcrição, onde destacamos aqui as proteínas da família SOX. A proteína SOX2, um membro da dessa família, está envolvida na promoção da tumorigênese, principalmente por associar-se a um fenótipo indiferenciado das células, porém, ainda não é muito bem estabelecida a sua influência em etapas mais tardias da carcinogênese. Assim objetivamos investigar, em modelo in vitro de células A375, SK-MEL-28 e 888-MEL e modelo espontâneo de melanoma canino, o envolvimento de SOX2 na regulação da TEM e da progressão tumoral. As linhagens celulares de melanoma foram silenciadas para SOX2 através do complexo lentivírus/shRNA e foram investigadas a sua capacidade de proliferação, migração celular e expressão gênica de marcadores envolvidos na Transição Epitélio-mesênquima. Nos melanomas caninos foram avaliados os parâmetros histopatológicos e realizada imunohistoquímica para mensuração da proliferação (Ki67), apoptose (Caspase-3), TEM (E-caderina e N-caderina) e do fator de transcrição SOX2. Nossos resultados demonstraram que as células com knockdown para SOX2 tiveram uma redução significativa tanto na proliferação quanto no potencial migratório. Além disso, a diminuição da expressão de SOX2 influenciou marcadores importantes da TEM, gerando um aumento significativo na expressão de E-caderina, uma diminuição na expressão de Vimentina e uma modulação distinta nos fatores de transcrição Snail, SLUG, ZEB1 e ZEB2, variando de acordo com a linhagem celular. Nos melanomas espontâneos caninos foi possível observar que o aumento de expressão da proteína SOX2 está associada à presença de êmbolos neoplásicos e com um maior índice apoptótico, representado pela expressão de Caspase-3. Adicionalmente observamos que melanomas cutâneos desses animais apresentaram correlação positiva entre a expressão de Ki67 e SOX2 citoplasmático. Coletivamente, nossos resultados evidenciam que SOX2 influencia diretamente em processos importantes da carcinogênese, mesmo em etapas consideradas um pouco mais tardias, como a TEM, um achado inédito na literatura até então. Análises avançadas de suas vias de atuação podem contribuir para o entendimento do desenvolvimento do tumor, bem como tornar essa proteína um marcador prognóstico e até mesmo um alvo terapêutico. |
Abstract: | Melanoma, an extremely aggressive skin cancer mainly due to its high invasive and migratory capacity, has a neoplastic progression that can be associated with processes that are hallmarks of cancers: resistance to apoptosis, epithelial-mesenchymal transition (EMT), exacerbated disorder and cellular dedifferentiation. Other markers involved in cell maturation and commonly deregulated in carcinogenesis are genes that encode transcription factors, where we highlight SOX family proteins, including SOX2. SOX2 is involved in promoting tumorigenesis, mainly because it is associated with an undifferentiated phenotype of cells, however, its influence on the later stages of carcinogenesis is not yet well programmed. Therefore, we aimed to investigate, in an in vitro model of A375, SK-MEL-28 and 888-MEL cells and a spontaneous model of canine melanoma, the involvement of SOX2 in the regulation of TEM and tumor progression. Melanoma cell lines were silenced for SOX2 through the lentivirus/shRNA complex and evaluated by flow cytometry to confirm knockdown. Silenced cells and their controls were also investigated for cell regulation and migration and gene expression of target markers in TEM. In canine melanomas, histopathological parameters were evaluated and immunohistochemistry was performed to measure planetary (Ki67), apoptosis (Caspase-3), TEM (E-cadherin and N-cadherin) and the transcription factor SOX2. Our results demonstrated that cells with SOX2 knockdown had a significant reduction in both safety and migratory potential. Furthermore, the decrease in SOX2 expression influenced important markers of TEM, generating a significant increase in the expression of E-cadherin, a decrease in the expression of Vimentin and a distinct modulation in the transcription factors Snail, SLUG, ZEB1 and ZEB2, ranging from according to cell lineage. In canine melanoma lesions, we observed that positive cases for SOX2 were associated with the presence of neoplastic emboli and a higher apoptotic index (represented by Caspase-3 expression). Cutaneous melanomas, when evaluated separately, showed a lower proliferative index and positive brightness between Ki67 and cytoplasmic SOX2. Collectively, our results demonstrate the influence of SOX2 directly on important processes of carcinogenesis, even in stages considered a little later, such as TEM, a finding initiated in the literature until then. Therefore, better elucidation of the mechanism of action of SOX2 in these pathways can contribute to the understanding of tumor development, as well as making this protein a prognostic marker and even a therapeutic target. |
Assunto: | Patologia Neoplasias Caspase 3 Melanoma Transição Epitelial-Mesenquimal |
Idioma: | por |
País: | Brasil |
Editor: | Universidade Federal de Minas Gerais |
Sigla da Instituição: | UFMG |
Departamento: | ICB - DEPARTAMENTO DE PATOLOGIA |
Curso: | Programa de Pós-Graduação em Patologia |
Tipo de Acesso: | Acesso Restrito |
metadata.dc.rights.uri: | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/ |
URI: | http://hdl.handle.net/1843/74245 |
Data do documento: | 19-Jan-2024 |
Término do Embargo: | 19-Jan-2026 |
Aparece nas coleções: | Teses de Doutorado |
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