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http://hdl.handle.net/1843/77829| Type: | Tese |
| Title: | Identificação de substância antimicrobiana produzida por Acinetobacter baumannii ativa contra amostras multidroga resistentes da bactéria |
| Other Titles: | Identification of an antimicrobial substance produced by Acinetobacter baumannii active against multidrug resistant strains of the bacterium |
| Authors: | Natália Rocha Guimarães |
| First Advisor: | Paula Prazeres Magalhães |
| First Co-advisor: | Luiz de Macêdo Farias |
| First Referee: | Glória Regina Franco |
| Second Referee: | Silvia Helena Sousa Pietra Pedroso |
| Third Referee: | Daniel Moreira dos Santos |
| metadata.dc.contributor.referee4: | Jacques Robert Nicoli |
| Abstract: | A resistência bacteriana é um desafio global. A busca por novos antimicrobianos, principalmente naturais, vem ganhando destaque, devido à emergência de bactérias resistentes a antimicrobianos clássicos. A. baumannii é uma bactéria de grande relevância clínica, marcadamente multirresistente e, assim, de difícil controle. O objetivo deste estudo foi identificar uma substância antimicrobiana expressa por uma amostra de A. baumannii, em continuação a um estudo prévio que detectou sua atividade contra amostras multidroga resistentes (MDR) da bactéria. Na primeira etapa, foi realizada extração plasmidial, expressão heteróloga em sistema E. coli transformado com o plasmídio selvagem isolado de A. baumannii, além da avaliação da expressão de antagonismo pelos métodos de sobrecamada e precipitação ácida, para verificar a localização do gene que codifica a substância. O plasmídio foi sequenciado em plataforma Illumina MiSeq e a similaridade das ORFs foi analisada em algoritmo Blast. Na segunda etapa do projeto, foi realizada a clonagem das ORFs em vetores TOPO e pET28aTEV, com o intuito de identificar o gene que codifica a substância. A expressão e a purificação das proteínas recombinantes foram avaliadas por SDS-PAGE corado por Coomassie Brilliant Blue e western blotting e a atividade antimicrobiana pelo método de sobrecamada. A substância antimicrobiana ativa foi expressa pelo sistema E. coli BL21 transformado, confirmando a presença do gene de interesse no plasmídio selvagem. A montagem do DNA plasmidial gerou um contig de 11,060 pb, com doze ORFs. A análise por similaridade permitiu classificar o pequeno plasmídio na família Rep-3, de acordo com a proteína de replicação RepB. Dentre as doze ORFs anotadas, cinco foram sugestivas da substância. Baseando-se em dados obtidos ao longo do desenvolvimento de todo o projeto sugere-se que a proteína hipotética 3 apresenta ação antibacteriana contra amostras MDR de A. baumannii. |
| Abstract: | Bacterial resistance is a global challenge. The search for new antimicrobials, mainly natural substances, has been gaining prominence due to the emergence of bacterial resistance to classic antimicrobial drugs. A. baumannii is a bacterium of great clinical relevance that expresses remarkable multidrug resistance and consequently is hard to control. The aim of this study was to identify an antimicrobial substance expressed by A. baumannii described during a previous study that demonstrated activity against multidrug resistant strains of the bacterium. In the first stage of this project, plasmid extraction was conducted to determine the location of the gene that codes for the substance. To confirm the results, heterologous expression in E. coli transformed with a wild plasmid was performed and evaluation of antagonistic activity by the double-layer diffusion and acid precipitation methods was done. The plasmid was sequenced (Illumina MiSeq) and similarity analysis using the BlastP was performed. In the second stage of the project the cloning of the ORFs was performed on TOPO and pET28aTEV vectors, with the aim to identify the gene that codes for the antimicrobial substance. The expression and purification of the recombinant proteins were evaluated by comassie stained SDS-PAGE and western blotting and evaluated by the double-layer diffusion method. The expression of the active protein was observed in a transformed E. coli BL21 system, confirming the presence of the gene of interest in the wild plasmid. The assembly of plasmid DNA generated a contig of 11,060 bp, with twelve ORFs. Similarity analysis allowed the small plasmid to be classified in the Rep-3 family, according to a RepB replication protein. Of the twelve ORFs annoted, five were suggestive of the substance. Based on data obtained throughout the development of the study, it is suggested that the hypothetical protein 3 is responsible for the antibacterial action observed against A. baumannii MDR strains. |
| Subject: | Microbiologia Acinetobacter baumannii Peptídeos Catiônicos Antimicrobianos Resistência Microbiana a Medicamentos Clonagem |
| language: | por |
| metadata.dc.publisher.country: | Brasil |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| metadata.dc.publisher.department: | ICB - DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA |
| metadata.dc.publisher.program: | Programa de Pós-Graduação em Microbiologia |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/77829 |
| Issue Date: | 31-Jan-2020 |
| Appears in Collections: | Teses de Doutorado |
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