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http://hdl.handle.net/1843/BUBD-8A5JR4
Type: | Tese de Doutorado |
Title: | Estudo comparativo da migração, integração e diferenciação de células-tronco mesenquimais provenientes de diferentes fontes em tecido retiniano lesado |
Authors: | Paula Castanheira |
First Advisor: | Alfredo Miranda de Goes |
First Co-advisor: | Marcio Bittar Nehemy |
First Referee: | Antonio Lucio Teixeira Junior |
Second Referee: | Gregory Thomas Kitten |
Third Referee: | Alexandre Leite Rodrigues Oliveira |
metadata.dc.contributor.referee4: | Nance Beyer Nardi |
Abstract: | Nosso objetivo foi avaliar a migração, integração e diferenciação retiniana de células-tronco mesenquimais (CTM) injetadas na cavidade vítrea de ratos portadores de lesões retinianas. Estudos morfológicos foram feitos em ratos Wistar adultos submetidos a múltiplas lesõesretinianas por meio do YAG laser foram submetidos à injeção intravítrea de células-tronco mesenquimais marcadas com DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindol) e Quantum Dot. Em duas, quatro e oito semanas o tecido retiniano lesado/tratado foi estudado com a finalidade de se avaliar a migração, integração e diferenciação retiniana.Para quantificação relativa de sobrevivência e efeito parácrino celular foram realizados ensaios de real time PCR em ratos Lewis submetidos a lesão com laser e injeção de CTMs EGFP. As células injetadas nacavidade vítrea sobreviveram na retina por pelo menos 8 semanas e de acordo com ensaios morfológicos por imunohistoquímica, quase todas CTM migraram para a retina neural e após 8 semanas a maioria das células marcadas com DAPI expressou rodopsina (marcador parafotorreceptores), parvalbumina (marcador para células bipolares e amácrinas) e GFAP (marcador de células gliais). Esse resultado, paralelamente a resultados obtidos com o marcador quantum dot sugere, que ocorreu difusão do DAPI para células de camadasadjacentes da retina. Resultados da quantificação relativa mostraram que as CTMs sobrevivem até 6 semanas, ocorrendo aumento de níveis gênicos de fatores neuroprotetores como BDNF e VEGF. Células-tronco injetadas na cavidade vítrea sofrem trofismo para o sítio de lesão. Não é possível afirmar se ocorrem diferenciação e incorporação de células-tronco mesenquimais na retina de ratos após injeção intravítrea destas células, pois a difusão do DAPI dificulta a interpretação dos resultados. |
Abstract: | To evaluate DAPI (4',6-Diamidino-2-phenylindole) as a nuclear tracer of stem cells migration and incorporation it was observed the pattern of retinal integration and differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs) injected into the vitreous cavity of rat eyes with retinal injury. For this purpose adult rat retinas were submitted to laser damage followed by transplantation of DAPI-labeled BM-MSCs grafts and double labeled DAPI and Quantum dot labeled BM-MSCs. To assess a possible DAPI diffusion as well as the integration and differentiation of DAPI labeledBM-MSCs in laser-injured retina, host retinas were evaluated 8 weeks after injury/transplantation. It was demonstrated that, 8 weeks after the transplant, most of the retinal cells in all neural retinal presented nuclear DAPI labeling, specifically in the outer nuclear layer (ONL), inner nuclearlayer (INL) and ganglion cell layer (GCL). Meanwhile, at this point, most of the double labeled BM-MSCs (DAPI and Quantum dot) remained in the vitreous cavity and no retinal cells presented the quantum dot marker. Based on these evidences we concluded that DAPI diffused toadjacent retinal cells while the nano crystals remained labeling only the transplanted BM-MSCs. Therefore, DAPI is not a useful marker for stem cells in vivo tracing experiments since, the DAPI released from dying cells in moment of the transplant are taken up by host cells in the tissue.Quantitative PCR results shows that MSCs survive for at least e weeks,. Also is was possible to observe higher levels of neuroproctetive factors such as BDNF e VEGF. |
Subject: | Bioquímica |
language: | Português |
Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
Publisher Initials: | UFMG |
Rights: | Acesso Aberto |
URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUBD-8A5JR4 |
Issue Date: | 16-Oct-2009 |
Appears in Collections: | Teses de Doutorado |
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