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http://hdl.handle.net/1843/BUBD-922GBT| Type: | Dissertação de Mestrado |
| Title: | Avaliação das técnicas de isolamento da massa celular interna de blastocistos para obtenção de células-tronco pluripotentes |
| Authors: | Renata de Lima Bossi |
| First Advisor: | Selmo Geber |
| First Referee: | Alfredo Miranda de Goes |
| Second Referee: | Marcia Mendonca Carneiro |
| Abstract: | As células-tronco embrionárias são pluripotentes, podendo dar origem a células e tecidos dos três folhetos embrionários. Elas oferecem uma alternativa para o tratamento e até mesmo cura de várias doenças, uma vez controladas a sua diferenciação e condições de cultivo. As células-tronco embrionárias oferecem também um modelo para teste de fármacos e de toxicidade, além de permitir o acompanhamento das modificações moleculares e celulares associadas às doenças. Diversas formas de cultivo já foram utilizadas com sucesso para originar novas linhagens de células-tronco embrionárias. Foram testadas algumas formas de isolamento da massa celular interna; vários tipos de meios de cultivo; diversos tipos de suplementos como soro, hormônios, fatores de crescimento, citocinas e determinados tipos de células alimentadoras. O objetivo desse estudo foi avaliar diferentes métodos de isolamento das células-tronco pluripotentes da massa celular interna de blastocistos utilizando a técnica mecânica, à laser, imunocirurgia ou plaqueamento total. Foram doados 27 embriões para pesquisa. Um embrião (3,7%) foi isolado mecanicamente; 3 (11,1%) isolados com imunocirurgia; 2 (7,4%) isolados com laser e 21 (77,8%) plaqueados total. A adesão foi confirmada 48 horas após o plaqueamento. Dezenove (70%) massas celulares internas isoladas aderiram às placas de Matrigel. Observamos que, após o plaqueamento total, 81% das células aderiram às placas, após a imunocirurgia a adesão foi de 33,3% e após o isolamento mecânico a adesão foi de 100%. Não observamos adesão quando isolamento foi feito com laser. Um total de 16 blastocistos era de boa qualidade com blastocele expandida, massa celular interna distinta e compacta. Onze blastocistos eram de baixa qualidade com blastocele pequena e massa celular interna indistinta. Não observamos diferença quando comparamos os resultados de adesão quando as células foram isoladas nos dias 5 ou 7 (66,7% x 77,8% , P=0,67). Também não observamos diferença nas taxas de adesão quando comparamos os métodos de retirada da zona pelúcida por laser ou pronase (33,3% x 75%, P= 0,20). A adesão foi significativamente maior quando os blastocistos eram de boa qualidade (87,5% x 63,6%, P= 0,011). Podemos concluir que dentre as técnicas utilizadas, a de plaqueamento total é de fácil aplicação e possui uma elevada eficácia para isolamento de células-tronco embrionárias. |
| Abstract: | Embryonic stem cells are classified as pluripotent and are able to differentiate into many of cell types and tissues from three germ layers.They represent an alternative for treatment and even cure of many diseases. Until now many different forms to isolate the inner cell mass have been tested, but none have shown to be a better option. Therefore theaim of this study was to evaluate different methods of stem cells isolation from a blastocyst's inner cell mass, using mechanical, laser, immunosurgery and whole blastocyst culture.Twenty seven embryos were donated for this research. One embryo (3,7%) was mechanically isolated; 3 (11.1%) were isolated by immunosurgery, 2 (7.4%) were isolated by laser and 21 (77.8%) bywhole blastocyst culture.Cell adhesion was confirmed 48 hours after cells plating. Nineteen (70%) isolated inner cell mass were attached in plates with Matrigel solution.We observed that after whole blastocyst culture, 81% of the cells were attached in plates; after immunosurgery, cell adhesion was 33% and after mechanical isolation the cell adhesion was increased 100%.Cellular adhesion was not observed when the cells were isolated by laser technique.A total of sixteen blastocysts presented good quality, expanded blastocoele and inner cell mass compact,large and distinguishable.Eleven blastocysts presented low quality, with small blastocoele and tiny or indistinguishable inner cell mass.No significant differences were observed in cellular adhesion when comparing the day of inner cell masss isolation on day 5 or 7 blastocysts (66,7% x 77,8% , P=0,67).Rates of cell adhesion were not significantly different when we compared the methods of zona pellucida removal by laser or Pronase (33,3% x 75%, P= 0,20).Cellular adhesion was significantly higher when good quality blastocysts were used (87,5% x 63,6%, P= 0,011). We can conclude that whole blastocyst culture is easily applicable and highly efficient for isolation of embryonic stem cells. |
| Subject: | Células tronco embrionárias Lasers Células-tronco pluripotentes Massa celular interna do blastocisto Células-tronco embrionárias Separação celular/métodos |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUBD-922GBT |
| Issue Date: | 10-Nov-2011 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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