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http://hdl.handle.net/1843/BUBD-928H8L
Full metadata record
DC Field | Value | Language |
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dc.contributor.advisor1 | Ricardo Tostes Gazzinelli | pt_BR |
dc.contributor.advisor2 | Helida Monteiro de Andrade | pt_BR |
dc.contributor.referee1 | Patricia Cuervo Escobar | pt_BR |
dc.contributor.referee2 | Maria de Fatima Martins Horta | pt_BR |
dc.contributor.referee3 | Adriano Monteiro de Castro Pimenta | pt_BR |
dc.contributor.referee4 | Clara Lúcia Barbiéri Mestriner | pt_BR |
dc.creator | Miriam Maria Silva Costa | pt_BR |
dc.date.accessioned | 2019-08-11T12:19:38Z | - |
dc.date.available | 2019-08-11T12:19:38Z | - |
dc.date.issued | 2011-09-14 | pt_BR |
dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/1843/BUBD-928H8L | - |
dc.description.abstract | Visceral leishmaniasis (VL) is a severe infectious disease caused by a protozoan of the genus Leishmania. In the Americas, the dog is the main reservoir of disease, mainly in urban areas where the disease is increasing. VL is fatal if it is not adequately treated and/or if it is not diagnosed early, however the efficacy of diagnostic methods andvaccines available remain partial, therefore it is necessary to develop new strategies. Several studies have demonstrated the potential of A2 protein, an amastigote stagespecific protein family in Leishmania, as vaccine and diagnosis. In our studies, using this antigen administered as DNA vaccine, we observed protection in mice against infection by L. (L.) chagasi and L. (L.) amazonensis. A2 antigen also induces protectionin phase II studies with beagle dogs vaccinated with A2 protein associated with the saponin adjuvant (constituting the vaccine Leish-tec.) against infection by L. (L.) chagasi. The partial protection induced by A2 antigen in vaccine studies led us to search for new proteins for further vaccine tests and future associations with the A2 antigen. Regarding the diagnosis, we found that the peptides derived from in silico analysis of the A2 protein, associated with peptides from other proteins such as NH, LACK and K39 showed high sensitivity and specificity in tests with human and canine sera. However, the search for vaccine and diagnosis antigens of VL is incessant, and the current stage of technological development with the possibility of using proteomic approach to identify hundreds of immunogenic antigens simultaneously is attractive. Thus, we chose aproteomic approach combined with in silico analyzes to identify new antigens of L. (L.) chagasi. Our proteomic analysis were the first to use amastigotes purified from hamster spleen and, furthermore, is the first study to map the antigenicity of infection by L. (L.) chagasi using sera from dogs of acute and chronic phase. All the selected protein bywestern blot-2DE (WB-2DE) were mapped to B cell epitopes by the BepiPred software and subjected to immunoassay through cellulose membranes resulting in the selection of 25 peptide with high potential for serological diagnosis of VL. In parallel, we used the technique of DIGE to compare the differential expression of proteins between the amastigote and promastigote forms of L. (L.) chagasi and 40 proteins were identified, 25 increased in promastigotes, 5 increased in amastigotes and 10 with similar expression in both forms. Moreover, all the proteins identified in the work by both DIGE as by WB 2DE have been mapped to T cell epitopes using the software NetCTL allowing the selection of potential candidates for vaccine development. Finally, to complete the analysis prediction for B cells, the same immunogenic proteins identified by WB-2DE were mapped using others two programs to predict epitopes (ABCPred and BCPred) and after additional analysis of immunoassays, more 23 peptides were identified as potential diagnostic antigens in the LVC. These new peptides, together with 25 previously identified, were subjected to immuno-enzymatic assays that resulted in 10 antigens withhigh sensitivity and specificity, even greater than that found by the EIE-LVC kit, which is recommended by the Ministry of Health, which also failed to detect asymptomatic dogs. Therefore, a large-scale analysis of L. (L.) chagasi through proteome was performed to identify B and T cell epitopes potentially useful in developing diagnostic tests and vaccines. | pt_BR |
dc.description.resumo | A leishmaniose visceral (LV) é uma doença infecciosa grave causada por protozoários do gênero Leishmania. Nas Américas, o cão é o principal reservatório da doença, principalmente nas áreas urbanas, onde encontra-se em grande expansão. A LV é fatal se não for tratada adequadamente e/ou diagnosticada precocemente, porém, a eficácia dos métodos diagnósticos e vacinas disponíveis permanece parcial, sendo necessário o desenvolvimento de novas estratégias. Vários estudos demonstraram o potencial da proteína A2, específica do estágio amastigota de Leishmania, como antígeno vacinal e diagnóstico. No presente trabalho, inicialmente, testamos este antígeno, administrado na forma de vacina de DNA e observamos proteção em camundongos contra a infecção por L. (L.) chagasi e L. (L.) amazonensis. A seguir, descrevemos a proteção, em estudos de fase II, com cães beagles vacinados com a proteína A2 associada ao adjuvante saponina (constituindo a vacina Leish-tec.) contra a infecção por L. (L.) chagasi. Com relação ao diagnóstico utilizando este antígeno, observamos que peptídeos provenientes de análises in silico da proteína A2, associados a peptídeos de outras proteínas como NH, LACK e K39 apresentaram elevada sensibilidade e especificidade em testes com soros humanos ecaninos. No entanto, a busca por antígenos vacinais e diagnóstico na LV é incessante, e o atual estágio de desenvolvimento tecnológico com a possibilidade de utilizar abordagem proteômica para identificação de centenas de antígenos imunogênicos simultaneamente é atraente. Dessa forma, optamos por uma abordagem proteômica associada a análises in silico para identificar novos antígenos de L. (L.) chagasi. Nossa análise proteômica foi a primeira a utilizar amastigotas purificadas de baço de hamster e, além disso, é o primeiro estudo a mapear a antigenicidade da infecção por L. (L.) chagasi utilizando soros de cães de fase aguda e crônica. Todas as proteínas selecionadas porwestern blot-2DE (WB-2DE) foram mapeadas para epítopos de células B pelo software BepiPred e submetidas `a imuno-ensaios em membranas de celulose resultando na seleção de 25 peptídeos com elevado potencial para o diagnóstico sorológico da LV. Paralelamente, foi utilizada a técnica de DIGE para comparar a expressão diferencial deproteínas entre as formas amastigota e promastigota de L. (L.) chagasi e 40 proteínas foram identificadas, sendo 25 aumentadas em promastigotas, 5 aumentadas em amastigotas e 10 com expressão similar em ambas as formas. Além disso, todas as proteínas identificadas no trabalho, tanto por DIGE como por WB-2DE, forammapeadas para epítopos de células T utilizando o software NetCTL que permitiu a seleção de potenciais candidatos para o desenvolvimento de vacinas. Por fim, para complementar a análise de predição para células B, as mesmas proteínas imunogênicas identificadas por WB-2DE forma mapeadas utilizando outros dois programas de predição de epítopos (ABCPred e BCPred) e após análise adicional de imuno-ensaios mais 23 peptídeos foram identificados como potenciais antígenos diagnóstico na LVC. Esses novos peptídeos, juntamente com os 25 previamente identificados, foram submetidos a ensaios imuno-enzimáticos que resultaram em 10 antígenos com elevada sensibilidade e especificidade, inclusive maior do que a encontrada pelo kit EIE-LVC, que é o recomendado pelo Ministério da Saúde, que também falhou em detectar cães assintomáticos. Portanto, uma análise em grande escala de L. (L.) chagasi através do proteoma foi realizada para identificar epítopos de células B e T com potencial para utilização no desenvolvimento de testes diagnósticos e vacinas. | pt_BR |
dc.language | Português | pt_BR |
dc.publisher | Universidade Federal de Minas Gerais | pt_BR |
dc.publisher.initials | UFMG | pt_BR |
dc.rights | Acesso Aberto | pt_BR |
dc.subject | Vacina | pt_BR |
dc.subject | Diagnóstico | pt_BR |
dc.subject | Proteoma | pt_BR |
dc.subject | L (L) chagasi | pt_BR |
dc.subject.other | Bioquímica e imunologia | pt_BR |
dc.title | Identificação e caracterização imunológica de antígenos de Leishmania (Leishmania) chagasi para o desenvolvimento de vacinas e alternativas emdiagnóstico da Leishmaniose visceral | pt_BR |
dc.type | Tese de Doutorado | pt_BR |
Appears in Collections: | Teses de Doutorado |
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