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Type: Tese de Doutorado
Title: Construção, avaliação da imunogenicidade e potencial protetor em modelo murino, de diferentes construções do Vaccinia virus Ankara modificado (MVA) expressando a proteína E de Dengue virus sorotipo 3
Authors: Barbara Resende Quinan
First Advisor: Flavio Guimaraes Fonseca
First Co-advisor: Fabiana Magalhaes Coelho
metadata.dc.contributor.advisor-co2: David Carl Tscharke
Abstract: A Dengue é, atualmente, a mais importante doença humana causada por um arbovírus. O vírus da Dengue (DENV) possui quatro sorotipos (DENV 1-4) e estimase que seja responsável por 390 milhões de infecções por ano em todo o mundo, sendo que dessas, pelo menos 2 milhões resultam nas formas graves da doença. Apesar dos altos números de casos por ano e de, aproximadamente, a metade da população do mundo estar sob-risco de infecção, não existem drogas antivirais para o tratamento da doença e, muito menos, vacinas aprovadas como prevenção. Dentre as técnicas utilizadas para o desenvolvimento de vacinas, a utilização de vetores virais recombinantes baseados no Vaccinia Ankara Modificado (MVA) vem se mostrado promissora. Dessa forma, esse trabalho realizou a construção de diversos vírus MVA recombinantes, todos expressando a proteína E de DENV-3, porém com diferentes elementos inseridos nas extremidades do gene exógeno. O objetivo foi avaliar qual desses elementos foi capaz de melhorar a imunogenicidade do vírus recombinante ou a detecção da proteína exógena. Para que a avaliação da resposta celular TCD8+ fosse possível, 2 epítopos para a proteína E de DENV-3 em camundongos C57BL/6 foram identificados e descritos. Assim, a avaliação da resposta TCD8+ em camundongos imunizados com os diferentes vírus recombinantes demonstrou que os vírus MVA recombinantes que possuem o peptídeo sinal natural da proteína E e, portanto, endereçam essa proteína para o retículo endoplasmático, apresentam uma melhor resposta. Avaliações da resposta humoral também demonstraram que esses vírus contendo essa sequência sinal são capazes de estimular uma produção robusta de anticorpos anti-E, enquanto os vírus sem o peptídeo sinal não induzem nenhuma produção de anticorpos. Além disso, análises de proteção em camundongos C57BL/6 sugerem que a imunização com essa construção mais imunogênica é protetora. Assim, esses resultados demonstram a importância dessa sequência de peptídeo sinal e, no futuro, essa construção mais imunogênica poderá ser utilizada para a construção de MVA recombinantes para os outros sorotipos de DENV. Esses, por sua vez, poderão ser utilizados para a geração de vacinas tetravalentes contra o DENV.
Abstract: Dengue is, currently, the most important human disease caused by an arbovirus. Dengue virus (DENV) has four serotypes (DENV 1-4) and is estimated to be responsible for 390 million infections per year worldwide, in which at least 2 million result in severe forms of the disease, Dengue hemorrhagic fever and Dengue shock syndrome (DHF/DSS). Despite the high number of cases per year and the fact that approximately half of the world's population are at risk of for dengue, effective drugs for the disease treatment and vaccines are still not available. Among different strategies used for vaccine development, vectors based on recombinant Vaccinia Ankara Modified virus (MVA) shows promise in a number of settings. Thus, in this work, several recombinants of MVA were constructed, all expressing the E protein of DENV-3, but with different elements inserted at the ends of the foreign gene. The ultimate aim was to test which of these modifications would make the most immunogenic vaccine. To enable CD8+ T cell responses evaluation, two epitopes in the DENV-3 E protein in C57BL/6 mice were identified and described. Thus, the evaluation of CD8+ T cell responses in mice immunized with the different recombinant viruses demonstrated that recombinant MVA viruses holding the natural signal peptide of the E protein and, therefore, addressing this protein into the endoplasmic reticulum, have a better response. Evaluations of the humoral response have also shown that these viruses containing this signal sequence are able to stimulate a robust production of anti-E antibodies, while the virus without the signal peptide does not induce any production of antibodies. Furthermore, analyses of protection in C57BL/6 mice suggest that immunization with this more immunogenic construct is protective. Thus, these results demonstrate the importance of this signal peptide sequence and, in the future, this more immunogenic construction could be used for construction of recombinant MVA to other DENV serotypes. Ultimately these could be combined to make a tetravalent DENV vaccine.
Subject: Vacinas recombinantes
Vaccinia
Vírus da dengue
language: Português
Publisher: Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials: UFMG
Rights: Acesso Aberto
URI: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9HKH5V
Issue Date: 20-Feb-2014
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