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http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9UKG2Y
Tipo: | Dissertação de Mestrado |
Título: | Caracterização estrutural e funcional de um homólogo à exotoxina esfoliativa D de Staphylococcus aureus envolvido na mastite subclínica de pequenos ruminantes |
Autor(es): | Natayme Rocha Tartaglia |
Primeiro Orientador: | Núbia Seyffert |
Primeiro Coorientador: | Vasco Ariston de Carvalho Azevedo |
Resumo: | A mastite é a mais comum e cara doença que afeta o gado leiteiro, sendo o Staphylococcus aureus o micro-organismo mais frequentemente isolado de casos clínicos dessa infecção. A enfermidade é caracterizada pela inflamação da glândula mamária, com sintomas locais que podem resultar em infecção sistêmica. Uma melhor compreensão dos fatores envolvidos na patogenicidade, assim como da resposta do hospedeiro à infecção por esse micro-organismo, são pontos essenciais para o desenvolvimento eficiente e satisfatório de terapias que permitam prevenir e combater a mastite. Embora considerado um patógeno oportunista, certas linhagens de S. aureus são mais aptas a causar patologias do que outras, devido a grande variedade de fatores de virulência associados a eles. Sendo assim, através de análises sorológicas do proteoma (SERPA), que permitem a identificação de proteínas imunorreativas diferencialmente expressas, o perfil patogênico das linhagens S. aureus O46, característica de mastite subclínica, e S. aureus O11, característica de uma mastite gangrenosa, foi avaliado. Baseado nesses dados, o objetivo do presente trabalho foi caracterizar uma proteína, codificada pela ORF O46_2740, imunoreativa somente na S. aureus O46 e homóloga a toxina esfoliativa D. Essa toxina é descrita como epidermiolítica e já foi associada a formação de impetigo bolhoso e síndrome da pele escaldada estafilocócica (SSSS). O modelo tridimensional por homologia da ORF O46_2740 foi elaborado in silico, utilizando um molde ETB depositado em bancos de dados. Para a caracterização in vivo, construímos linhagens recombinantes de L. lactis na forma secretada, utilizando o sistema de expressão XIES, induzido por xilose. Os clones foram avaliados por imunodetecção e não foi possível confirmar a expressão nesse sistema. Como alternativa, a ORF foi sintetizada com códons preferenciais para E. coli e avaliado em cinco linhagens de expressão, o qual uma obteve melhor resultado. A ETD-like foi purificada e posteriormente confirmada por Western blotting utilizando anticorpo monoclonal anti-His. A fração solúvel foi dosada e aplicada no dorso de camundongos neonatos Balb/c para avaliação da formação de bolhas e esfoliação característica da toxina. Os resultados preliminares da avaliação in vivo apontam reações bolhosas, porém, novos ensaios são necessários para corroborar a atividade esfoliativa. |
Abstract: | Mastitis is the most common and costly disease affecting dairy cattle, being S. aureus the most frequently isolated microorganism from clinical cases of this infection. This disease is characterized by inflammation of the mammary gland, with local symptoms that can result in systemic infection. A better understanding of the factors involved in pathogenicity, as well as the host response to infection by this microorganism, are key points for an efficient and satisfactory development of therapies to prevent and combat mastitis. Although considered an opportunistic pathogen, certain strains of S. aureus are more prone to cause pathologies than others, due to the variety of virulence factors associated to them. Through serological proteome analysis (SERPA) that enables the identification of differentially expressed immunoreactive proteins, the pathogenic profiles of S. aureus strains O46 - characteristic of subclinical mastitis - and O11 - characteristic of gangrenous mastitis - were evaluated. Based on these data, the aim of this study was to characterize a protein, encoded by the ORF O46_2740, immunoreactive only in S. aureus O46 and homologous to exfoliative toxin D. This protein is considered epidermolytic toxin and was associated to bullous impetigo and staphylococcal scalded skin syndrome (SSSS). A three-dimensional homology model was designed in silico using an ETB mold deposited in databases. For in vivo characterization we obtained recombinant strains of L. lactis containing the ORF O46_2740 coupled with the XIES expression system, but Western blotting did not confirm the production of ETD-like protein. Alternatively, the ORF was introduced in E. coli under control of T5 promoter, and the expression of ETD-like was successfully confirmed by Western blotting. ETD-like was purified using anti-His monoclonal antibody and applied on the back of newborn Balb/c mice to evaluate its effects on the skin. Preliminary results of in vivo assessment indicated the formation of bullous reactions also caused by the epidermolytic activity of S. aureus ETD; however, no exfoliative activity was observed. |
Assunto: | Mastite Toxinas Bovino de leite Doenças Genética Staphylococcus aureus |
Idioma: | Português |
Editor: | Universidade Federal de Minas Gerais |
Sigla da Instituição: | UFMG |
Tipo de Acesso: | Acesso Aberto |
URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9UKG2Y |
Data do documento: | 25-Ago-2014 |
Aparece nas coleções: | Dissertações de Mestrado |
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