Efeitos antiarritmogênicos da angiotensina-(1-7) em um modelo de arritmias cardíacas in vivo

Julliane Vasconcelos Joviano dos Santos

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DC Field	Value	Language
dc.contributor.advisor1	Anderson Jose Ferreira	pt_BR
dc.contributor.referee1	Marco Antonio Peliky Fontes	pt_BR
dc.contributor.referee2	Jose Felippe Pinho da Silva	pt_BR
dc.creator	Julliane Vasconcelos Joviano dos Santos	pt_BR
dc.date.accessioned	2019-08-14T06:07:17Z	-
dc.date.available	2019-08-14T06:07:17Z	-
dc.date.issued	2015-01-30	pt_BR
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9WAHSW	-
dc.description.abstract	Angiotensin (Ang)-(1-7), a peptide of the renin-angiotensin system, has cardioprotective and antiarrhythmic effects in isolated rat hearts. However, the effects of this peptide on cardiac arrhythmias in vivo and details regarding its mechanisms of action are unknown. The aim of this study was to investigate the effects of Ang-(1-7) on cardiac arrhythmias in vivo and its mechanisms of action. Cardiac arrhythmias were induced in Wistar rats using a combination of halothane (1.5%) and epinephrine (5 to 20g/kg, iv). Electrocardiographic records were made by placing an electrode in each rat limb. A 10-minute period of arrhythmias was followed by an additional 10-minute period of arrhythmias in the presence Ang-(1-7). To analyze the mechanisms of action, we used A-779 [antagonist of Ang-(1-7) receptor], L-NAME (inhibitor of nitric oxide synthases) and DIZE [activator of the ACE2, the main Ang-(1-7)-forming enzyme]. Blood pressure and heart rate were evaluated by a cannula inserted into the femoral artery. Our data showed that Ang-(1-7) significantly reduced cardiac arrhythmias when compared with control [Control: 49±13 and Ang-(1-7): 16±4 arrhythmic events]. This effect was blocked by A-779 and L-NAME, without changes in the hemodynamic parameters. DIZE injection also promoted a significant reduction in the arrhythmic events. To confirm these in vivo antiarrhythmic effects of Ang-(1-7), ventricular cardiomyocytes were isolated from mice and used in three experimental techniques (analysis of contractility, patch clamp and confocal microscopy). Cardiomyocytes were perfused with a solution of halothane plus isoproterenol in order to trigger arrhythmias. Contractility experiments confirmed that Ang-(1-7) and DIZE significantly decrease the amount of arrhythmias without changing the contraction force. To evaluate if this reduction in arrhythmias was associated to alterations in the excitability of cardiomyocytes, we analyzed the action potential. The results showed a shortening of the action potential and a decrease in the resting potential of cardiomyocytes treated with Ang-(1-7) and DIZE. These actions can be considered as cardioprotective effects. Finally, we analyzed the involvement of calcium in these effects using confocal microscopy and it was observed that Ang-(1-7) and DIZE decreased the amount of calcium waves. There were no significant changes in the amplitude of the calcium transient, but considering the transient decay, we observed a significant reduction in this parameter only in cells incubated with Ang-(1-7). Altogether, these results indicate that Ang-(1-7) reduces cardiac arrhythmias in vivo through activation of Mas and nitric oxide release. This effect was confirmed by DIZE. These data suggest that Ang-(1-7) and DIZE might be a feasible therapeutic agent to treat arrhythmogenic syndromes.	pt_BR
dc.description.resumo	O sistema renina-angiotensina é importante na regulação cardiovascular e na geração e condução do impulso cardíaco. Estudos já demonstraram que a Angiotensina (Ang)-(1-7) possui efeitos antiarrítmicos e cardioprotetores em corações isolados de ratos. Contudo, os efeitos da Ang-(1-7) nas arritmias cardíacas in vivo ainda não foram avaliados. Sendo assim, o objetivo desse projeto foi investigar o efeito antiarrítmico da Ang-(1-7) in vivo e seus mecanismos de ação. Para isso, arritmias foram induzidas em ratos com uma combinação de halotano (1,5%) e adrenalina (5 a 20 g/kg; via veia jugular). Eletrodos foram posicionados para registros eletrocardiográficos. O protocolo experimental foi composto por 10 min de registro das arritmias desencadeadas pela adrenalina, seguidos de mais 10 min de registro das arritmias causadas por nova injeção de adrenalina associada a Ang-(1-7) (0,04; 4 ou 400 nM). Para avaliação dos mecanismos de ação foi utilizado A-779, antagonista do receptor da Ang-(1-7), L-NAME, inibidor inespecífico das óxido nítrico (NO) sintases, e o DIZE, ativador da ECA2 [principal enzima formadora de Ang-(1-7)]. Parâmetros hemodinâmicos (pressão arterial e frequência cardíaca) foram analisados a partir de uma cânula inserida na artéria femoral. Nossos resultados indicaram que a Ang-(1-7) (4 nM) reduz significativamente a quantidade de arritmias quando comparado ao controle [49±13 eventos arrítmicos vs. 16±4 eventos arrítmicos na presença da Ang-(1-7)]. Esse efeito foi bloqueado pelo A-779, pelo L-NAME e não provocou alterações nos parâmetros hemodinâmicos. A injeção do DIZE também promoveu uma redução significativa das arritmias. A fim de confirmar os efeitos antiarrítmicos in vivo da Ang-(1-7), bem como analisar esses efeitos a nível celular, cardiomiócitos ventriculares de camundongos foram isolados e utilizados em três técnicas experimentais (análise da contratilidade, patch clamp e microscopia confocal). Uma solução de halotano+isoproterenol foi administrada nos cardiomiócitos com o objetivo de desencadear as arritmias. Nos experimentos de contratilidade foi confirmado que a Ang-(1-7) e o DIZE diminuem significativamente a quantidade de arritmias sem alterar a força de contração. Para avaliar se a redução das arritmias está relacionada com alterações na excitabilidade dos cardiomiócitos, nós analisamos o potencial de ação dessas células. Os resultados mostraram um encurtamento do potencial de ação e diminuição do potencial de repouso dos cardiomiócitos tratados com Ang-(1-7) ou DIZE, o que pode ser considerado um efeito cardioprotetor. Por fim, analisamos a participação do cálcio nesses efeitos utilizando a técnica de confocal e observamos que a Ang-(1-7) e o DIZE diminuem a quantidade de waves. Não houve alteração significativa na amplitude do transiente de cálcio mas, considerando o decaimento do transiente, foi observada uma redução significativa desse parâmetro no grupo de células incubadas apenas com a Ang-(1-7). Assim, concluímos que a Ang-(1-7) reduz as arritmias in vivo via Mas e liberação de NO. Esse efeito foi confirmado pela administração do DIZE que também apresentou efeito antiarrítmico. Estes dados sugerem que a Ang-(1-7) e o DIZE podem ser úteis para o tratamento de síndromes arritmogênicas que levam à morte súbita.	pt_BR
dc.language	Português	pt_BR
dc.publisher	Universidade Federal de Minas Gerais	pt_BR
dc.publisher.initials	UFMG	pt_BR
dc.rights	Acesso Aberto	pt_BR
dc.subject	Morte súbita	pt_BR
dc.subject	Correntes iônicas	pt_BR
dc.subject	Enzima-conversora de angiotensina 2	pt_BR
dc.subject	Sistema renina-angiotensina	pt_BR
dc.subject	Arritmias cardíacas	pt_BR
dc.subject.other	Angiotensina	pt_BR
dc.subject.other	Arritmias cardíacas	pt_BR
dc.subject.other	Morte subita	pt_BR
dc.title	Efeitos antiarritmogênicos da angiotensina-(1-7) em um modelo de arritmias cardíacas in vivo	pt_BR
dc.type	Dissertação de Mestrado	pt_BR
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