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http://hdl.handle.net/1843/BUBD-A2FGCX| Type: | Tese de Doutorado |
| Title: | Caracterização estrutural da proteína Sm21.7 recombinante de Schistosoma mansoni |
| Authors: | Mariana Amalia Figueiredo Costa |
| First Advisor: | Ronaldo Alves Pinto Nagem |
| Abstract: | A esquistossomose é uma doença inflamatória crônica que representa um grave problema de saúde pública nos países tropicais e subtropicais. A droga de escolha para o tratamento, Praziquantel, é eficaz contra vermes adultos, mas não contra formas imaturas e, além disso, não previne a reinfecção. Um importante candidato para constituir uma vacina antiesquistossomose é a proteína Sm21.7 de Schistosoma mansoni, que foi capaz de reduzir a carga parasitária em modelo murino de imunização. Sm21.7 é constituída por um domínio de mão EF N-terminal e um domínio de cadeia leve de dineína C-terminal. No presente trabalho, o gene codificador de Sm21.7 foi clonado e expresso em Escherichia coli e a proteína recombinante (rSm21.7) foi purificada. Análises de Dicroísmo Circular demonstraram que a proteína encontrava-se parcialmente enovelada, com aproximadamente 37% de -hélice e 15% de fitas-. rSm21.7 comportou-se como um dímero em análises de cross-linking com glutaraldeído. Cristais de rSm21.7 foram obtidos utilizando PEG monometileter 2.000 e PEG 8.000 como precipitantes em diferentes condições. Imagens de difração de raios X de um cristal nativo (2,05Å de resolução) e um cristal derivado de NaI (1,95Å de resolução) foram coletados na linha W01B-MX2 do Laboratório Nacional de Luz Síncrotron (LNLS). Ambos os cristais pertenciam ao sistema cristalino hexagonal com parâmetros de célula unitária semelhantes a=b=108,5; c= 55,8 Å. As fases foram obtidas por SIRAS e usadas para gerar o primeiro mapa de densidade eletrônica no qual um modelo parcial foi construído. Esse modelo passou por vários ciclos de refinamento para obtenção de uma estrutura final. O modelo possuía apenas 96 resíduos da parte Cterminal (de Gln89 a Asn184 domínio de cadeia leve de dineína) e a clivagem da proteína na gota de cristalização foi confirmada por SDS-PAGE de cristais dissolvidos. O domínio de cadeia leve de dineína da proteína que foi cristalizado possui 2 -hélices e quatro fitas- que formam uma folha- antiparalela. A determinação da estrutura do domínio C-terminal de rSm21.7 auxiliou na localização de epítopos responsáveis pela resposta protetora conferida pela proteína. |
| Abstract: | Schistosomiasis is an inflammatory chronic disease that represents a major health problem in tropical and subtropical countries. The drug of choice for the treatment, Praziquantel, is effective in killing adult worms, but fails to kill immature forms and prevent reinfection. One important candidate to compose an antischistosomiasis vaccine is the protein Sm21.7 from Schistosoma mansoni, that is capable to reduce the worm burden in a murine immunization model. Sm21.7 has an Nterminal EF hand domain and a C-terminal dynein light chain domain. In the present work, the Sm21.7 gene was cloned and the recombinant protein (rSm21.7) expressed in Escherichia coli and purified to homogeneity. Circular Dichroism analysis showed that the protein was partly folded with 37% of -helices and 15% of -strands. rSm21.7 showed to behave as a dimer in a cross-linking with glutaraldehyde experiment. Crystals of rSm21.7 suitable for X-ray diffraction studies were obtained using PEG monomethyl ether 2,000 and PEG 8,000 as precipitants in diferent conditions. X-ray diffraction images of a native crystal (at 2.05 Å resolution) and a NaI derivative (at 1.95 Å resolution) were collected at W01B-MX2 beamline at the Laboratório Nacional de Luz Síncrotron (LNLS). Both crystals belong to the hexagonal system with similar unit cell parameters a=b=108.5, c= 55.8 Å. SIRAS-derived phases were used to generate the first electron density map where a partial model of rSm21.7 was automatically constructed. The model consists of 96 C-terminal amino acid residues of the full-length protein (from Gln89 to Asn184 dynein light chain domain) and the cleavage of the protein in the crystallization drop was confirmed by SDS-PAGE using sample from dissolved crystals. The Dynein Light Chain domain which was crystallized has 2 - helices and 4 -strands that form an antiparallel -sheet. The structure of the rSm21.7 C-terminal domain allowed the localization of epitopes responsible for the protective response elicited by the protein. |
| Subject: | Bioquímica |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUBD-A2FGCX |
| Issue Date: | 28-Nov-2014 |
| Appears in Collections: | Teses de Doutorado |
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