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http://hdl.handle.net/1843/BUBD-A2KHYQ| Type: | Tese de Doutorado |
| Title: | Fracionamento e identificação de proteínas de linhaça dourada(Linum usitatissimum L.) associadas aos metais Cu, Fe e Zn |
| Authors: | Deyse de Brito Marthe |
| First Advisor: | Leticia Malta Costa |
| First Co-advisor: | Rodinei Augusti |
| First Referee: | Clesia Cristina Nascentes |
| Second Referee: | Ricardo Mathias Orlando |
| Third Referee: | Cassiana Seimi Nomura |
| metadata.dc.contributor.referee4: | Robson Jose de Cassia Franco Afonso |
| Abstract: | A linhaça (Linum usitatissimum L.) é conhecida pelo seu elevado valor nutricional, devido, principalmente, ao seu alto conteúdo de fibras, ligninas e proteínas. Apesar de pouco conhecido, sua fração proteica também produz efeitos benéficos à saúde. Por isso, o objetivo deste trabalho foi o estudo das proteínas de linhaça dourada associadas aos metais Cu, Fe e Zn. Inicialmente, foi desenvolvido e validado um método para quantificação destes metais na amostra utilizando a digestão assistida por radiação micro-ondas em forno com cavidade e espectrometria de absorção atômica por chama. Visto que a digestão foi mais eficiente na amostra sem a fração oleosa, diferentes marcas de linhaça dourada sem fração lipídica foram analisadas e obteve-se maior concentração de Fe, seguido de Zn e Cu. Para garantir a extração proteica, essa fase oleosa deve ser retirada e, por isso, investigou-se como solventes de diferentes polaridades, hexano, clorofórmio e metanol, utilizados nesta etapa podem interagir com a fase oleosa e afetar a integridade da ligação metal-proteína. As concentrações de Cu, Fe e Zn foram maiores nos sobrenadantes obtidos após a extração proteica dos resíduos sem a fração lipídica, após a utilização de hexano como extrator. As proteínas nestes mesmos resíduos também foram extraídas pelo método sequencial e foi possível relacionar a presença de albuminas e globulinas com os metais estudados. A fase oleosa da linhaça dourada foi retirada com hexano e extraiu-se as proteínas do resíduo sem lipídios com a solução tampão em Tris-HCl para serem fracionadas em uma coluna cromatográfica por exclusão molecular. A fração que possuía os maiores teores proteicos e altas concentrações de metais foi selecionada e analisada por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas sequencial. Vinte e uma proteínas foram identificadas e dentre elas, proteínas de armazenamento. Como foram adotados procedimentos não desnaturantes, possivelmente os metais estudados possuem grande afinidade pelas proteínas identificadas. Outras cinco marcas de linhaça dourada foram submetidas à extração proteica e observou-se, pelo perfil eletroforético, que existem diferenças na composição de subunidades entre as marcas investigadas. Os teores proteicos obtidos variaram de 2 a 6 mg mL-1 e os metais Cu, Fe e Zn também foram quantificados nestes extratos, com concentrações médias de Fe em torno de 120 g L-1, de 50 g L-1 para Cu e de 20 g L-1 para Zn. |
| Abstract: | Flaxseed (Linum usitatissimum L.) is known for its high nutritional value, mainly due to the high fiber, lignin and proteins content, which has beneficial health effects. Then, the goal of this work was to study the golden flaxseed proteins bound to the metals Cu, Fe and Zn. Initially, it was developed and validated a method to determinate metals in golden flaxseed samples using an acid digestion assisted by microwave radiation in a cavity system. The metals were quantified by flame atomic absorption spectrometry (FAAS). Digestion procedure was more efficient in a sample without oily fraction, so different brands of golden flaxseed without lipid fraction were analyzed. Iron obtained the highest concentration, followed by Zn and Cu, respectively. The polarity of the organic solvents can affected the metal-protein bound and disrupted it. In this sense, sample preparation was evaluated with different organic solvents, as hexane, chloroform and methanol. The content of Cu, Fe and Zn were higher in supernatants obtained after protein extraction in the sample without the lipid fraction using hexane as extractor. Proteins in these residues were also extracted by the sequential procedure and it was possible to relate the presence of albumin and globulins with the metals. After, the golden flaxseed oil phase was removed with hexane and the proteins were extracted in the lipid-free residue with Tris-HCl buffer solution to be fractionated in a molecular exclusion column chromatography. A protein fraction which higher absorbance and metals concentration was selected and analyzed by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Twenty-one proteins were identified including storage proteins. As procedures used were non-denaturing it is possible to say that the metals have a great affinity for the identified proteins. Another five golden flaxseed brands were submitted to protein extraction and it was observed by electrophoretic profile that they have different subunit composition. The protein levels obtained ranged from 2 to 6 mg ml-1 and the metals Cu, Fe and Zn were also quantified in these extracts, obtaining medium values of 50, 120 and 20 g L-1, respectively. |
| Subject: | Química analítica Síntese orgânica Metais Proteinas Catalisadores |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUBD-A2KHYQ |
| Issue Date: | 9-Jul-2015 |
| Appears in Collections: | Teses de Doutorado |
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