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Type: Tese de Doutorado
Title: Estudo da inibição do sistema complemento humano pela saliva de anofelinos (Diptera; Anophelinae) neotropicais
Authors: Antonio Ferreira Mendes de Sousa
First Advisor: Nelder de Figueiredo Gontijo
First Referee: Nagila Francinete Costa Secundino
Second Referee: Sydnei Magno da Silva
Third Referee: Alvaro Cantini Nunes
metadata.dc.contributor.referee4: Erika Martins Braga
Abstract: Mosquitos pertencentes ao genero Anopheles sao os transmissoresnaturais de malaria no mundo. A transmissao ocorre durante a hematofagia, quando esses insetos inoculam na pele do hospedeiro formas infectantes do Plasmodium sp. juntamente com o conteudo de suas glandulas salivares. A saliva desses mosquitos contem moleculas importantes para o sucesso da hematofagia, como vasodilatadores e anticoagulantes. Entretanto, ha pouca informacao existente sobre a interacao de componentes salivares de anofelinos com o sistema imune do hospedeiro vertebrado. Este trabalho teve como objetivodemonstrar e caracterizar a atividade inibidora do sistema complemento na saliva de anofelinos, principalmente A. albimanus e A. aquasalis, importantes vetores de malaria na America Latina. Para isso, ensaios hemoliticos, ensaios de deposicao e Western blots para detectar ativacao de componentes do complemento foram realizados na presenca de extrato de glandulas salivares dos mosquitos. Os resultados desses experimentos mostraram inibicao significativa edose-dependente da via alternativa do sistema complemento pelo extrato de glandulas salivares das duas especies citadas. O inibidor salivar de A. albimanus foi purificado em HPLC e identificado por espectrometria de massa como sendo a proteina gSG7. O gene dessa proteina foi entao clonado e expresso em bacterias. A proteina recombinante apresentou atividade tao potente quanto o extrato deglandula salivar de A. albimanus. Anticorpos produzidos contra a recombinante foram capazes de reconhecer tanto a recombinante como a proteina nativa presente no extrato de glandulas, alem de bloquear a atividade das duas formas da proteina. Atraves de ensaio de ELISA e de ressonancia plasmonica de superficie, demonstramos que a gSG7 liga-se em properdina, um regulador positivo da via alternativa do complemento, bloqueando a acao estabilizadora dessa via. Esta e a primeira descricao de um inibidor do complemento na salivade mosquitos, e apresenta potencial importancia no processo hematofagico e na transmissao do Plasmodium sp.
Abstract: Anopheles mosquitoes are the natural vectors of malaria throughout theworld. The transmission occurs during bloodmeal, when the insects inject infective forms of Plasmodium together with the contents of their salivary glands. Their saliva presents active molecules important for hematophagy, such as vasodilators, anticoagulant and platelet inhibitors. However, little is known about the interactions of Anopheles salivary components with the hosts immune system. The aim of this work was to demonstrate and to characterize anticomplement activity in the saliva of neotropical anophelines, specially A. albimanus and A. aquasalis, important malaria vectors in Latin America. Hemolytic assays, ELISA assays and Western blots for detecting activation of complement components were performed in the presence and absence ofsalivary glands extracts of both mosquito species. The results showed significant and dose-dependent inhibition of the alternative pathway by the saliva of the two species. The salivary inhibitor of A. albimanus was then purified using HPLC and identified by mass spectrometry, as being a gSG7 protein. The gene of that protein was cloned and expressed in E. coli bacteria. The recombinant protein presented anti-complement activity as potent as the salivary glands extracts. Anti-recombinant gSG7 IgG antibodies produced in rabbits were able to detect both the recombinant and the native protein in the glands extract. The antibodies also blocked gSG7 activity in the hemolytic assays. Through ELISA and surface plasmon resonance, we showed that gSG7 binds directly to properdin, apositive regulator of the alternative pathway of the complement system. This is the first report of an anti-complement molecule in mosquito saliva, which has potential role in blood-feeding and parasite transmission by the vector.
Subject: Parasitologia
language: Português
Publisher: Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials: UFMG
Rights: Acesso Aberto
URI: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AAGHUQ
Issue Date: 1-Dec-2015
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