Please use this identifier to cite or link to this item:
http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AE7HYA| Type: | Dissertação de Mestrado |
| Title: | Investigação de algumas atividades biológicas da peçonha da serpenteMicrurus lemniscatus (Linnaeus, 1758) |
| Authors: | Thiago Geraldo Soares |
| First Advisor: | Maria Elena de Lima Perez Garcia |
| First Co-advisor: | Marcia Helena Borges |
| Abstract: | O estudo das peçonhas de serpentes é importante para o desenvolvimento de terapias contra acidentes ofídicos e também porque estas peçonhas são fontes de moléculas com potencial terapêutico, uma vez que podem ser utilizadas como protótipos para o desenvolvimento de fármacos e de outros produtos biotecnológicos.Neste contexto, no presente estudo, realizamos uma caracterização bioquímica parcial e investigamos algumas atividades biológicas da peçonha de M. lemniscatus e das frações obtidas por fracionamento por exclusão molecular (Superose 12). As frações (EM-F1 - EM-F11) obtidas foram submetidas à SDS-PAGE e à espectrometria de massas (MALDI-TOF), o que mostrou que a peçonha é composta principalmente, por componentes com massas moleculares de 6 - 8 kDa e 12 - 14kDa. O screening de atividades biológicas demonstrou que a peçonha apresentou atividades fosfolipásica A2 (EM-F3 a EM-F10), hialuronidásica (EM-F1 e EM-F2) e hemaglutinante (EM-F6 e EM-F7), além de ter induzido perda da adesão celular em adenocarcinoma de mama em cultura (EM-F1 e EM-F2). Adicionalmente, a peçonhainduziu atividade antimicrobiana contra Staphylococcus aureus (ATCC® 6538) (EM-F1 e EM-F2). Frente ao surgimento de bactérias super-resistentes aos antibióticos comerciais e ao interesse em investigar agentes antimicrobianos a partir de fontes naturais, isolamos e caracterizamos química e farmacologicamente, a enzima L-aminoácido oxidase, Ml-LAAO. Esta enzima foi purificada porcromatografia de troca aniônica (Synchropack AX300) e apresentou Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) de 1,56 g/mL contra Staphylococcus aureus (ATCC® 6538). Adicionalmente, a toxicidade celular desta molécula foi avaliada em três linhagens celulares (THLE-2, WI26-VA4 e HEK- 293), o que mostrou que esta não é tóxica para estas células quando testada nas concentrações de CIM/CBM obtidos contra Staphylococcus aureus. Além disso, Ml-LAAO não causou hemólise em eritrócitos de coelho e não induziu lise de lipossomos. A análise por espectrometria de massas MALDI-TOF mostrou uma massa molecular aparente de aproximadamente 69 kDa para Ml-LAAO. Nosso trabalho mostrou a primeira L-aminoácido oxidase isolada da peçonha de M. lemniscatus. No entanto, novos estudos são necessários para caracterizar a atividade enzimática de Ml-LAAO e compreender seu mecanismo de ação em bactérias. |
| Abstract: | The study of snake venoms is useful to development of therapies against snakebites and these venoms are also source of molecules with therapeutic potential. Therefore it can be used as prototypes for the development of drugs and other biotechnological products. In this context, we performed a partial biochemical characterization and investigated some biological activities of M. lemniscatus venom and its fractionsobtained by fractionation by size exclusion (Superose 12). The fractions (EM-F1 - EM-F11) obtained were submitted to SDS-PAGE and to mass spectrometry (MALDITOF) analysis. The results showed that this venom consists mainly of components with molecular weights of 6 - 8 kDa and 12 - 14 kDa. The screening of biological activities demonstrated that the venom displayed phospholipase A2 (EM-F3 to EMF10), hyaluronidase (EM-F1 and EM-F2) and hemagglutinating (EM-F6 and EM-F7) activities and causes loss of cell adhesion in mammary adenocarcinoma in culture (EM-F1 and EM-F2). Additionally, this venom induced antimicrobial activity against Staphylococcus aureus (ATCC® 6538) (EM-F1 and EM-F2). Due to the emergence of super-resistant bacteria to commercial antibiotics and to the interest in investigating antimicrobial agents from natural sources, we isolated and characterized chemically and pharmacologically Ml-LAAO. This enzyme was purified by anion exchange chromatography (Synchropack AX300) and showed a Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and a Minimum Bactericidal Concentration (MBC) of1.56 g/mL against Staphylococcus aureus, (ATCC® 6538). In addition, cellular toxicity of this molecule was assessed in three cell lines (THLE-2, WI-26 VA4 and HEK-293), which showed that it is not toxic for these cells, when tested at the MIC/MBC concentrations obtained against Staphylococcus aureus. Furthermore, Ml-LAAO did not cause hemolysis in rabbit erythrocytes and did not induce liposome lysis. The MALDI-TOF mass spectrometric analyses showed an apparent molecular mass of approximately 69 kDa to Ml-LAAO. Our results showed the first L-amino acid oxidase isolated from the M. lemniscatus venom. However, more studies are need to characterize the enzymatic activity of Ml-LAAO and to understand its mechanism of action in bacteria. |
| Subject: | Micrurus lemniscatu Venenos de serpentes Peçonhas Bioquímica e imunologia Anti-Infecciosos |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AE7HYA |
| Issue Date: | 11-Sep-2015 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| dissertac_a_o_final_thiago_geraldo_soares_110915_pgbiq.pdf | 1.45 MB | Adobe PDF | View/Open |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.