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http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AEEQ9A| Tipo: | Dissertação de Mestrado |
| Título: | Efeito dos ligantes do Receptor do Fator de Crescimento Epidermal (EGFR) para sua translocação nuclear |
| Autor(es): | Carolina de Andrade |
| Primeiro Orientador: | Dawidson Assis Gomes |
| Primeiro Coorientador: | Jerusa Araújo Quintão Arantes Faria |
| Primeiro membro da banca : | Maria Cassia Ferreira de Aguiar |
| Segundo membro da banca: | Jader Araújo dos Santos Cruz |
| Resumo: | O receptor do fator de crescimento epidermal (EGFR) ao entrar em contato com seus ligantes é ativado e se torna capaz de gerar diversos sinais como proliferação, diferenciação, migração e sobrevivência celular. Estudos recentes demonstram que o EGFR ativado pode gerar efeitos intranucleares, consistindo assim um novo modo de sinalização. A superexpressão desse receptor no núcleo está relacionada com a resistência ao tratamento e com a presença de tumores mais agressivos. Visto que os dados recentes demonstram a importância do EGFR nuclear para a sinalização tumoral, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a translocação nuclear do EGFR estimulada pelos ligantes EGF, HB-EGF, TGF-, -celulina, Anfiregulina e Epiregulina. Foram utilizadas células endoteliais de tumor hepático humano SKHep-1, as quais expressam altos níveis de EGFR. Observamos que ocorre translocação de EGFR após estímulo com EGF, HB-EGF, TGF- e -celulina e quanto maior a concentração do estímulo, maior a taxa de translocação nuclear do receptor. Os ligantes epiregulina e anfiregulina não geraram a translocação nuclear do EGFR. A ativação de tirosinas, serinas e treoninas na cauda carboxiterminal do EGFR foi avaliada por western blot após estímulo com 100 ng/mL de cada ligante e observou-se um perfil diferencial de fosforilação em vários resíduos específicos. Em geral, os ligantes que fosforilaram menos sítios foram epiregulina e anfiregulina. O teste de migração celular foi realizado para avaliar se os ligantes de EGFR eram eficientes na cicatrização de ferida em monocamada celular. Os ligantes EGF, HB-EGF, -celulina, TGF- e epiregulina apresentaram maior taxa de fechamento da ferida quando comparados aos grupos sem soro e anfiregulina. Por fim, o ensaio de curva de crescimento e o ensaio de clonogenicidade indicaram que os ligantes não foram capazes de gerar o crescimento celular e a formação de colônias, quando utilizados isoladamente em meio sem soro. Estes dados indicam que o EGFR é translocado para o núcleo após estímulo por EGF, HB-EGF, TGF-, -celulina e que estes mesmos ligantes geram maior perfil de fosforilação em resíduos de tirosina na cauda carboxiterminal do EGFR. |
| Abstract: | The epidermal growth factor receptor (EGFR) once in touch with their ligands is activated and becomes able to generate a range of signals such as proliferation, differentiation, migration and cell survival. Recent studies demonstrated that the activated EGFR can generate intranuclear effects, giving rise a new signaling mode. The receptor overexpression in the nucleus is related with tumor treatment resistance and it agressiveness. Since recent data show the importance of nuclear EGFR for tumor signaling, this study aimed to evaluated the nuclear translocation of EGFR stimulated by the ligands EGF, HB-EGF, TGF-, -cellulin, Amphiregulin and Epiregulin. For that, we used the hepatic human endothelial tumor cells - SKHep-1, which express high levels of EGFR. We observed that translocation to the nucleus happens after stimulation with EGF, HB-EGF, TGF- and -cellulin and the higher the concentration of stimulus, the greater the rate of nuclear translocation. The ligands Amphiregulin and Epiregulin did not generate nuclear translocation of EGFR. The activation of tyrosines, serines and threonines in the carboxiterminus of EGFR were evaluated by western blot after stimulus with 100 ng/mL of which ligand and we observed a different profile of phosphorylation of specific residues. In general, the binding sites that are less phosphorylated are the ones stimulated by the ligands Amphiregulin and Epiregulin. The cellular migrations experiment was performed to evaluate whether the EGFR ligand were efficient in the wound healing in the cell monolayer. The ligands EGF, HB-EGF, TGF-, -cellulin and Epiregulin showed a higher wound closure rate when compared with the groups Amphiregulin and serum free. Finally the growth curve and the clonogenic assay indicated that the ligands were not able to generate cellular division and colony formation when used alone in the serum free medium. All together, these data indicated that EGFR is translocated to the nucleus after stimulation with EGF, HB-EGF, TGF- and -cellulin and the same ligands generate more phosphorylation of tyrosines in the carboxiterminus of EGFR. |
| Assunto: | Proliferação de células Câncer Receptor do fator de crescimento epidérmico Ligantes (Bioquímica) Bioquímica e imunologia Western blotting |
| Idioma: | Português |
| Editor: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Sigla da Instituição: | UFMG |
| Tipo de Acesso: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AEEQ9A |
| Data do documento: | 25-Fev-2015 |
| Aparece nas coleções: | Dissertações de Mestrado |
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