1. Repositório Institucional da UFMG
  2. Trabalhos Acadêmicos
  3. Dissertações e Teses
  4. Pós-Graduação em Bioquímica e Imunologia
  5. Dissertações de Mestrado
Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AHKP9K
Full metadata record
DC FieldValueLanguage
dc.contributor.advisor1Carlos Delfin Chavez Olorteguipt_BR
dc.contributor.advisor-co1Francisco Santos Schneiderpt_BR
dc.creatorPatrícia Donado Vaz de Melopt_BR
dc.date.accessioned2019-08-10T10:14:13Z-
dc.date.available2019-08-10T10:14:13Z-
dc.date.issued2016-02-16pt_BR
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/1843/BUBD-AHKP9K-
dc.description.abstractThe venom of the spider Loxosceles intermedia contains proteins with sphingomyelinase activity (SMase D), the main dermonecrotic component responsible for the prevalent symptoms of cutaneous and cutaneous visceral loxoscelism like dermonecrosis and acute renal failure. After the immunization of mice with crude venom of Loxosceles intermedia spider, our group obtained the monoclonal antibody Li mAb(7), which has been shown to neutralize the dermonecrotic activity from the venom of L. intermedia in a dose-dependent relationship, 50 ug Li mAb(7) neutralized 10 g of crude venom, and therefore has high potential for use in anti-venom therapy. In addition, the monoclonal antibody Li mAb(7) showed no cross-reactivity with venoms of Loxosceles laeta (Brazil), L. laeta (Perú) and Loxosceles gaucho. In order to obtain peptides with high potential neutralizing the toxic effects of L. intermedia, which are able to overcome difficulties in the production of sera, like the poison obtainment and the maintenance of serum neutralization capacity, this study was dedicated to the mapping of paratope of Li mAb(7). Using on bioinformatics tools and Spot Synthesis methodology the complementarity determining regions were identified, peptides on cellulose membrane were synthesized from structural analyzes of antigen-antibody interactions and the essential amino acids residues for recognition of the protein with sphingomyelinase activity and their locations have been mapped. The soluble peptides were produced and sandwich ELISA assay demonstrated that peptides bind in a specific and dose-dependent manner, the same conformational epitope recognized by Li mAb(7). Competition ELISA assay did not confirm the competition for the same binding site between soluble peptides (607 and 642) and monoclonal, however, it is believed that due to high affinity of antibody for the epitope. Neither the neutralizing capacity of sphingomyelinase activity was demonstrated. Thus, it was demonstrated that peptides derived from the soluble mapping Li mAb(7) specifically recognize the same epitope and have a conformational structure similar to the Fv region of the antibody.pt_BR
dc.description.resumoO veneno da aranha Loxosceles intermedia contém proteínas com atividade de esfingomielinase (Smase D), principal componente dermonecrótico, responsável pelas preponderantes características do loxoscelismo cutâneo e cutâneo visceral como: a dermonecrose e insuficiência renal aguda. A partir da imunização de camundongos com o veneno bruto da aranha Loxosceles intermedia, nosso grupo obteve o anticorpo monoclonal Li mAb(7), que demonstrou ser capaz de neutralizar a atividade dermonecrótica do veneno da L. intermedia numa relação dose-dependente; 50 g de Li mAb(7) neutralizou significativamente 10 g de veneno bruto e, portanto possui alto potencial para ser utilizado na terapia antiveneno. Além disso, o Li mAb(7) não possui reatividade cruzada com venenos de Loxosceles laeta (Brasil), L. laeta (Peru) e Loxosceles gaucho. Visando a obtenção de peptídeos com elevado potencial neutralizante dos efeitos tóxicos da L. intermedia, capazes de superar dificuldades na produção de soros, como a obtenção do veneno e a reprodutibilidade inter e intraindividual da atividade neutralizante do soro, este estudo se dedicou ao mapeamento dos paratopos do Li mAb(7). Utilizando ferramentas de bioinformática e a metodologia Spot Synthesis, as regiões determinantes de complementariedade foram identificadas, peptídeos em membrana de celulose foram sintetizados a partir da análise estrutural da interação antígeno-anticorpo e os aminoácidos essenciais para o reconhecimento da proteína com atividade de esfingomielinase e suas localizações foram mapeadas. Na sequência, peptídeos solúveis foram produzidos. Por ensaio de ELISA sanduíche foi demonstrado que os peptídeos se ligam, de uma maneira específica e dose-dependente, ao mesmo epitopo conformacional reconhecido pelo Li mAb(7). No entanto, o ensaio de ELISA por competição não confirmou a disputa entre os peptídeos solúveis (607 e 642) e o anticorpo monoclonal pelo mesmo sítio de ligação. Tampouco a capacidade neutralizante da atividade de esfingomielinase foi demonstrada. Assim, demonstrou-se que os peptídeos solúveis originados do mapeamento do Li mAb(7), reconhecem especificamente o mesmo epitopo e por ferramentas de bioinformática possuem estrutura conformacional semelhante a região Fv do anticorpo.pt_BR
dc.languagePortuguêspt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de Minas Geraispt_BR
dc.publisher.initialsUFMGpt_BR
dc.rightsAcesso Abertopt_BR
dc.subjectComponente dermonecróticopt_BR
dc.subjectNeutralizaçãopt_BR
dc.subjectLoxosceles intermediapt_BR
dc.subjectPeptídeospt_BR
dc.subjectLi mAb(7)pt_BR
dc.subjectMapeamentopt_BR
dc.subjectParatopopt_BR
dc.subjectEsfingomielinase Dpt_BR
dc.subject.otherBioquímica e imunologiapt_BR
dc.titleMapeamento dos paratopos do anticorpo monoclonal Li mAb(7) anti-proteína dermonecrótica do veneno da aranha Loxosceles intermediapt_BR
dc.typeDissertação de Mestradopt_BR
Appears in Collections:Dissertações de Mestrado

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
disserta__o_patricia_donado___mapeamento_paratopo_anticorpo_limab7_____09_08_16.pdf1.57 MBAdobe PDFView/Open
Show simple item record


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.